[發明專利]短瓣石竹的組織培養繁殖方法

無效

• 申請號: 201410036700.6
• 申請日: 2014-01-26
• 公開（公告）號: CN103749307A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 閆志剛;韋瑩;董青松;吳慶華;胡秀月;黃保成;黃英群;劉凡
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 楊立華

1.一種短瓣石竹的組織培養繁殖方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）外植體的取材與消毒：取短瓣石竹剪切成2-3cm的帶芽莖段作為外植體進行消毒；

（2）無菌試管苗的獲取：將消毒好的外植體置于誘導培養基中進行不定芽誘導發芽得到無菌試管苗；

（3）試管苗增殖培養：將無菌試管苗置于增殖培養基中進行培養獲得大量不定芽；

（4）試管苗壯苗培養：將繁殖后的不定芽置于壯苗培養基中進行壯苗培養得到健壯植株；

（5）試管苗生根培養：將健壯植株置于生根培養基中培養得到完整的帶根苗；

（6）試管苗煉苗移栽：篩選完整的帶根苗進行煉苗后移植于基質中培養，再移栽至大田；所述誘導培養基以MS為基本培養基，附加4.5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，培養基pH值為5.8，并添加1.0mg·L^-1的6-芐基腺嘌呤、0.1mg·L^-1的萘乙酸；

所述增殖培養基以MS為基本培養基，附加4.5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培養基pH值為5.8，并添加0.1-2.0mg·L^-1的6-芐基腺嘌呤、0.01-1.0mg·L^-1的萘乙酸、0.1-0.5mg·L^-1的吲哚乙酸；

所述壯苗培養基以MS為基本培養基，附加4.5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培養基pH值為5.8，并添加0.1-1.5mg·L^-1的6-芐基腺嘌呤、0.1-2mg·L^-1的萘乙酸；

所述生根培養基以1/2MS為基本培養基，附加4.5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培養基pH值為5.8，并添加0.05-1.0mg·L^-1的吲哚丁酸、0.5-2.0mg·L^-1的萘乙酸。

2.根據權利要求1所述的短瓣石竹的組織培養繁殖方法，其特征在于步驟（1）中的消毒按以下操作進行：首先將2-3滴洗潔精滴入裝50ml自來水的燒杯中，把外植體放入燒杯輕輕攪拌2min，再用棉花清洗外植體表面污垢，自來水輕微流水沖洗8-10min；移置超凈工作臺，用75%乙醇浸泡30s，無菌水沖洗一遍，然后再用添加了1-2滴吐溫-20的50ml濃度為0.1%升汞消毒6-8min、無菌水沖洗3-5次，最后放置消毒好的不銹鋼碟子，剪切成1.0-1.5cm長的帶芽莖段，獲得無菌外植體。

3.根據權利要求1所述的短瓣石竹的組織培養繁殖方法，其特征在于步驟（2）至（5）的培養條件為：溫度為23-25℃，光照強度1500-2000lux，光照時間為10-12h/d。

4.根據權利要求3所述的短瓣石竹的組織培養繁殖方法，其特征在于步驟（2）至（5）的培養時間分別為：15-20d、30d、30d、25d。

5.根據權利要求1所述的短瓣石竹的組織培養繁殖方法，其特征在于步驟（6）中的煉苗移栽按以下操作進行：經過步驟（5）獲得帶根的完整植株，待苗長至5-6cm,根長至2-4cm時，選擇生長良好、整齊、健壯的瓶苗，在室溫為23-25℃的室內進行煉苗，并在瓶中加入少量自來水淹沒培養基，煉苗5-7d，用鑷子取出試管苗，洗凈根部培養基，移栽到基質中生長40-50d，再移栽至大田。

6.根據權利要求5所述的短瓣石竹的組織培養繁殖方法，其特征在于：所述基質為珍珠巖、砂石及泥沙按1:2:1的比例混合。

7.短瓣石竹組織培養的培養基，包括誘導培養基、繁殖培養基、壯苗培養基、生根培養基，其特征在于：

所述誘導培養基以MS為基本培養基，附加4.5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，培養基pH值為5.8，并添加1.0mg·L^-1的6-芐基腺嘌呤、0.1mg·L^-1的萘乙酸；

所述增殖培養基以MS為基本培養基，附加4.5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培養基pH值為5.8，并添加0.1-2.0mg·L^-1的6-芐基腺嘌呤、0.01-1.0mg·L^-1的萘乙酸、0.1-0.5mg·L^-1的吲哚乙酸；

所述壯苗培養基以MS為基本培養基，附加4.5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培養基pH值為5.8，并添加0.1-1.5mg·L^-1的6-芐基腺嘌呤、0.1-2mg·L^-1的萘乙酸；

所述生根培養基以1/2MS為基本培養基，附加4.5g·L^-1瓊脂，30g·L^-1蔗糖，1g·L^-1活性炭，培養基pH值為5.8，并添加0.05-1.0mg·L^-1的吲哚丁酸、0.5-2.0mg·L^-1的萘乙酸。