[發明專利]槲皮素?3?O?脂肪酸酯的酶催化制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201410036289.2
• 申請日: 2014-01-24
• 公開（公告）號: CN103865962B
• 公開（公告）日: 2017-03-22
• 發明（設計）人: 段煜
• 申請（專利權）人: 濰坊醫學院
• 主分類號: C12P17/06
• 分類號: C12P17/06;A61K31/352;A61P7/02
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙)11411
• 代理人: 鄭自群

技術領域

本發明涉及藥物化學技術領域，特別是指一種槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制備方法及其應用。?

背景技術

槲皮素是一種重要的黃酮類化合物，幾乎存在于所有具活血化瘀功效的中草藥中，且毒副作用低，提取分離工藝成熟簡單。槲皮素表現顯著的抗血小板聚集活性，對ADP、AA、PAF、膠原、凝血酶誘導的血小板聚集都有明顯的抑制作用。但目前沒有抗血小板聚集的槲皮素類藥物進行臨床使用，這主要是由于槲皮素溶解性差，成藥性差，生物利用度低。通過結構修飾對槲皮素的3位羥基進行酯化，引入脂肪酰基，改變大平面的分子構型和分子間的緊密排列，溶劑容易進入分子間隙，從而改善溶解性，同時保留活性基團（3’,4’鄰二位羥基和7位羥基），可以改善成藥性，提高藥效。?

槲皮素-3-O-脂肪酸酯為具有通式（Ⅰ）的化合物，式中R=C1-C4烷基。翟廣玉等專利（中國專利201210113907.X）以蘆丁為起始原料，經過芐基化、酸性條件下水解、酯化、催化氫解四步反應制備了槲皮素-3-O-酰基酯類化合物，反應步驟多，使用的芐基化試劑刺激性和毒性大，催化氫解反應有一定的危險性。因此需要改進。?

發明內容

本發明提出一種槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制備方法，具有反應條件溫和、產率高，反應路線短、操作簡便、后處理簡單、便于工業化生產的特點，解決了現有技術中相應的技術問題。?

本發明的技術方案是這樣實現的：?

槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制備方法，包括以下步驟：?

（1）將槲皮素加入到無水有機溶劑中，槲皮素的摩爾濃度為0.01～0.1mol/L，在10～100℃的條件下，堿性催化劑的催化作用下，與酸酐或酰氯酰化反應3～5小時得到槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯；?

（2）將所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯加入到無水有機溶劑中，槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯的摩爾濃度為0.002～0.04mol/L，在20～80℃的條件下，脂肪酶Lipozyme?IM的催化作用下，與正丁醇發生醇解反應30～100小時得到槲皮素-3-O-脂肪酸酯；?

所述無水有機溶劑選自乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷和甲基叔丁基醚中的一種或幾種；?

所述堿性催化劑選自三乙胺、吡啶和Na₂CO₃中的一種或幾種；?

所述脂肪酶Lipozyme?IM選自Lipozyme?IM-20、Lipozyme?IM-60中的一種；?

所述槲皮素-3-O-脂肪酸酯為具有通式（Ⅰ）的化合物，式中R=C1-C4烷基。?

作為對上述技術方案的改進，步驟（1）中，所述槲皮素、酸酐或酰氯和堿性催化劑的摩爾比為1：5～15：5～15；步驟（2）中，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和脂肪酶Lipozyme?IM的質量比為1：0.5～3，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和正丁醇的摩爾比為1：4～12。?

作為對上述技術方案的改進，步驟（1）中，所述槲皮素的摩爾濃度為0.022mol/L，反應溫度為25℃，反應時間為3.5～4.5小時；步驟（2）中，槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯的摩爾濃度為0.008～0.02mol/L，反應溫度為45℃，反應時間為45～96小時。?

作為對上述技術方案的改進，步驟（1）中，所述槲皮素、酸酐或酰氯和堿性催化劑的摩爾比為1：10：10；步驟（2）中，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和脂肪酶Lipozyme?IM的質量比為1：1，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和正丁醇的摩爾比為1：10。?

作為對上述技術方案的改進，步驟（1）中，用GF254硅膠薄層層析板監測反應時間，展開劑為乙酸乙酯/丙酮/冰乙酸（6：6：1.5，體積比），至槲皮素斑點消失時酰化反應終止。?

作為對上述技術方案的進一步改進，步驟（1）中，酰化反應終止后，反應液依次用1mol/L的鹽酸水溶液、飽和碳酸鈉水溶液洗滌，收集有機層，并用去離子水洗滌至中性，加入無水Na₂SO₄脫水，靜置10～12小時，過濾得濾液，濾液在20kPa,40～70℃下減壓旋蒸除去無水有機溶劑得槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯。?