[發明專利]槲皮素?3?O?脂肪酸酯的酶催化制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201410036289.2
• 申請日: 2014-01-24
• 公開（公告）號: CN103865962B
• 公開（公告）日: 2017-03-22
• 發明（設計）人: 段煜
• 申請（專利權）人: 濰坊醫學院
• 主分類號: C12P17/06
• 分類號: C12P17/06;A61K31/352;A61P7/02
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙)11411
• 代理人: 鄭自群

1.槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將槲皮素加入到無水有機溶劑中，槲皮素的摩爾濃度為0.01～0.1mol/L，在10～100℃的條件下，堿性催化劑的催化作用下，與酸酐或酰氯酰化反應3～5小時得到槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯；

（2）將所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯加入到無水有機溶劑中，槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯的摩爾濃度為0.002～0.04mol/L，在20～80℃的條件下，脂肪酶Lipozyme?IM的催化作用下，與正丁醇發生醇解反應30～100小時得到槲皮素-3-O-脂肪酸酯；

所述無水有機溶劑選自乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷和甲基叔丁基醚中的一種或幾種；

所述堿性催化劑選自三乙胺、吡啶和Na₂CO₃中的一種或幾種；

所述脂肪酶Lipozyme?IM選自Lipozyme?IM-20、Lipozyme?IM-60中的一種；

所述酸酐為乙酸酐；

所述酰氯為丙酰氯、正丁酰氯或正戊酰氯；

所述槲皮素-3-O-脂肪酸酯為具有通式（Ⅰ）的化合物，式中R=C1-C4烷基。

2.如權利要求1所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制備方法，其特征在于：步驟（1）中，所述槲皮素、酸酐或酰氯和堿性催化劑的摩爾比為1：5～15：5～15；

步驟（2）中，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和脂肪酶Lipozyme?IM的質量比為1：0.5～3，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和正丁醇的摩爾比為1：4～12。

3.如權利要求1所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制備方法，其特征在于：步驟（1）中，所述槲皮素的摩爾濃度為0.022mol/L，反應溫度為25℃，反應時間為3.5～4.5小時；

步驟（2）中，槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯的摩爾濃度為0.008～0.02mol/L，反應溫度為45℃，反應時間為45～96小時。

4.如權利要求1所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制備方法，其特征在于：步驟（1）中，所述槲皮素、酸酐或酰氯和堿性催化劑的摩爾比為1：10：10；

步驟（2）中，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和脂肪酶Lipozyme?IM的質量比為1：1，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和正丁醇的摩爾比為1：10。

5.如權利要求1所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制備方法，其特征在于：步驟（1）中，用GF254硅膠薄層層析板監測反應時間，展開劑為乙酸乙酯/丙酮/冰乙酸（6：6：1.5，體積比），至槲皮素斑點消失時酰化反應終止。

6.如權利要求5所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制備方法，其特征在于：步驟（1）中，酰化反應終止后，反應液依次用1mol/L的鹽酸水溶液、飽和碳酸鈉水溶液洗滌，收集有機層，并用去離子水洗滌至中性，加入無水Na₂SO₄脫水，靜置10～12小時，過濾得濾液，濾液在20kPa,40～70℃下減壓旋蒸除去無水有機溶劑得槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯。

7.如權利要求1所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制備方法，其特征在于：步驟（2）中，用GF254硅膠薄層層析板監測反應時間，展開劑為乙酸乙酯/丙酮/冰乙酸（6：6：1.5，體積比），至槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯斑點消失時醇解反應終止。

8.如權利要求7所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制備方法，其特征在于：步驟（2）中，過濾除去脂肪酶Lipozyme?IM終止醇解反應，濾液在20kPa,40～70℃下減壓旋蒸除去無水有機溶劑，所得粗品經聚酰胺色譜柱純化后得槲皮素-3-O-脂肪酸酯。

9.如權利要求1～8任一項所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制備方法，其特征在于：所述槲皮素-3-O-脂肪酸酯應用于制備抗血小板聚集的藥物。