[發明專利]一株米曲霉PRB-1菌株

有效

• 申請號: 201410036055.8
• 申請日: 2014-01-26
• 公開（公告）號: CN103740602A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 吳惠玲;胡文鋒;袁國新;顏喆;孔德華;林康藝;李萌
• 申請（專利權）人: 廣東珠江橋生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A23L1/238;C12R1/69
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

技術領域

本發明涉及工業微生物技術領域。更具體地，涉及一株米曲霉PRB-1菌株。

背景技術

醬油屬于傳統發酵調味食品，菌種是發酵的基礎，其性能對醬油產量和質量影響甚大。米曲霉（Aspergillus?oryzae）是釀造醬油中必不可少的微生物，也是釀造醬油生產過程中的核心技術。醬油釀造主要依賴于米曲霉所產生的豐富的酶系，來分解原料中的多種成分，從而形成醬油獨特的色、香、味、體。醬油生產米曲霉菌種的生產性能決定了醬油的品質及原料利用率，優良米曲霉菌種的選用能夠提高原料的利用率，縮短發酵周期，降低生產成本，提高醬油的風味和品質，因此，醬油釀造選育優良的米曲霉菌株至關重要，它關系到醬油的產量和質量。

目前，我國醬油釀造企業90%以上使用的是米曲霉（Aspergillus?oryzae）滬釀3.042，該菌種具有生長快、產孢子多、酶系豐富、中性蛋白酶活性高等優點，是醬油釀造的主要菌種。然而，隨著發酵時間的延長，其蛋白酶活力迅速下降，導致釀造醬油的原料蛋白利用率和氨基酸轉化率偏低，產品風味較弱。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有用于釀造醬油的米曲霉的不足，提供一株優良的、孢子豐富、蛋白酶活高、發酵醬油產量高、質量好的米曲霉菌株。

本發明的另一目的是提供所述米曲霉PRB-1菌株的培養方法。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

????本發明提供了一株米曲霉（Aspergillus?oryzae）菌株，所述菌株為米曲霉PRB-1菌株，該菌株于2013年12月4日保藏于中國典型培養物保藏中心（地址為中國武漢市武漢大學），保藏編號為CCTCC?NO：M?2013628。

?所述的米曲霉PRB-1菌株屬于曲霉目、曲霉科、曲霉屬。

?所述的米曲霉PRB-1菌株的形態學特征描述如下：

菌落呈圓形，質地疏松，菌落中間部位著生孢子多，孢子粗壯，菌絲層厚；菌落生長初期小、白色、圓形，隨著菌落的逐漸長大，白色范圍也逐漸擴大，菌絲層變厚，菌落的中心開始著生淺黃綠色的孢子，然后淺黃綠色逐步向四周擴散；菌落成熟后孢子呈黃綠色，孢子粗壯，菌絲層厚。

上述米曲霉PRB-1菌株是從廣東珠江橋生物科技股份有限公司的醬油種曲中，經過大量的復壯篩選、分離、純化獲得的。

具體地，本發明所述米曲霉PRB-1菌株的分離獲得方法如下：

S1.分離復壯：取廣東珠江橋生物科技股份有限公司釀造醬油種曲，無菌操作，制備成孢子懸液，按照10倍梯度稀釋法，分別用無菌生理鹽水將孢子懸液稀釋到10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6的濃度，得孢子稀釋液；取所述孢子稀釋液涂布于復壯分離培養基平板上進行培養；挑選其中菌落生長快、透明圈大、菌落大、孢子多的菌株進行進一步的純化；

S2.純化：將S1挑選的菌落生長快、透明圈大、菌落大、孢子多的單菌落孢子接種于改良豆汁固體培養基上進行培養，待長出單菌落，即獲得純菌株；

S3.鑒定：根據菌株的形態學特征進行初步鑒定，所述米曲霉菌株的形態學特征描述如下：

菌落呈圓形，質地疏松，菌落中間部位著生孢子多，孢子粗壯，菌絲層厚；菌落生長初期小、白色、圓形，隨著菌落的逐漸長大，白色范圍也逐漸擴大，菌絲層變厚，菌落的中心開始著生淺黃綠色的孢子，然后淺黃綠色逐步向四周擴散；菌落成熟后孢子呈黃綠色，孢子粗壯，菌絲層厚；

S4.篩選：對上述培養得到的純菌株進行擴大培養以及生產試產，篩選出一株生長速度快，種曲和成曲的孢子豐富，孢子發芽率高，蛋白酶活最高的菌株。該菌株命名為米曲霉PRB-1菌株，已于2013年12月4日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO：M?2013628，保藏地址為中國武漢市武漢大學。

其中，S1所述的復壯分離培養基平板為酪蛋白豆汁平板，其配制方法為：稱取干酪素4g，KH₂P0_4?0.36g，無水MgSO₄?0.50g，Na₂HPO₄?1.07g，大豆提取物2.0g，瓊脂粉20.0g，溶于1000mL蒸餾水，調pH值至?6.5～7.0，分裝，0.1MPa、121℃滅菌20min。