[發明專利]一種微生物谷氨酰胺轉胺酶及其制備的日常用止血產品

有效

• 申請號: 201410035709.5
• 申請日: 2014-01-24
• 公開（公告）號: CN103820411A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 易正芳;呂方;裴正培;劉明耀
• 申請（專利權）人: 華東師范大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;A61K38/45;A61P7/04;A61P17/02;A61K38/39
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

技術領域

本發明屬于醫藥領域，具體涉及一種含有微生物谷氨酰胺轉胺酶的創可貼及其制備方法和應用。?

背景技術

日常生活中，人們常會遭受小創傷而引起出血，如果不及時止血，可能會引起感染和創傷加劇。目前，理想的止血材料應具備以下特征：止血迅速、持久；無毒副作用，不誘導血栓形成；不增加感染機會，不影響組織愈合；簡便實用等。?

日常創傷類止血產品主要包括貼劑、敷劑、藥用紗帶或綁帶、凝膠狀或塊狀，其中貼劑類止血產品(如創可貼等)是人們生活中最常用的一種外科用藥，俗稱“止血膏藥”，具有止血，護創作用。?

以創可貼為例，其適合創傷較為表淺，傷口整齊干凈、出血不多而又不需要縫合的小傷口使用。如果皮膚的傷口相對較深，而又無條件處理，用創可貼進行簡單包扎。但目前市售的創可貼包扎時間不能太長，最好不超過兩天。因創可貼具有壓迫止血，保護創面，預防感染，促進愈合，攜帶方便，使用簡單等優點，其已經成為人們日常生活中必備止血衛生用品。?

目前市售創可貼大致有兩類：不含藥創可貼、含藥創可貼。不含藥創可貼雖然具備消炎和防護感染的作用，但對于傷口快速止血、防止傷口粘連等方面作用效果欠佳，容易造成傷口與創可貼粘連和二次出血；含藥創可貼比不含藥創可貼止血效果強，但傷口與創可貼易粘連的問題仍然存在，且往往有一定的毒副作用。總體而言，調查表明超過50％的民眾認為市售創可貼無法達到理想的止血效果，因此，很有必要研發新一代止血效果好、防傷口粘連且低副作用的創可貼。?

谷氨酰胺轉胺酶(蛋白質-谷氨酸-γ-谷氨酰胺轉胺酶，Transglutaminase，簡稱TGase)，又稱轉谷氨酰胺酶或γ-谷氨酰胺酰基轉移酶，由331個氨基組成，催化酰基轉移反應，能催化蛋白質分子內或分子間的交聯、蛋白質和氨基酸之間的連接以及蛋白質分子內谷氨酰胺基的水解，從而改善蛋白質的結構和功能特性。由于其卓越的交聯特性，被譽為“21世紀超級粘合劑”。在食品、醫藥、紡織、化妝品等領域展現出廣泛前景(崔艷華等《生物技術通報》，2009年第一期)?

TGase廣泛存在于動、植物和微生物機體組織。最近的研究發現，不同來源的TGase在氨基酸序列、分子量大小、酶的理化性質具有差異。動物來源的TGase分子量不等，需要鈣離子激活，酶活性中心為半胱氨酸殘基位點。動物來源的TGase以豚鼠肝臟的TGase(GTG)研究最?為深入，該酶的分子量為90kD，其酶促反應需要鈣離子激活。對底物特異性強，同時由于該酶含有17個半胱氨酸殘基致使其熱穩定性差。在50℃下，10分鐘后，酶活性僅為殘留40％。鈣離子對植物來源的TGase活性影響因物種而異。從動物組織中提取的TGase來源少，成本高，分離程序復雜，不易推廣應用。?

TGase在植物組織中扮演何種角色仍不十分清楚，Kang等從大豆葉片中提取TGase進行了研究。但是分離純化工藝復雜，酶的得率較低。目前，尚未有植物來源TGase用于商業化生產。?

但是，微生物來源的TGase(mTG)與動物來源的TGase具有不同的酶特性，mTG分子量在23～45kD之間，多數為40kD左右，為動物來源TGase分子量的一半左右。重要的是，mTG具有較強的熱穩定性，且在相對較寬的pH范圍內均具有較高活性。同時，mTG的酶活性完全不依賴于鈣離子，所以有廣泛的底物特異性的酰基供體，這一點與動植物來源的TGase完全不同。同時，mTG較GTG相比，在高壓條件下具有更為顯著的穩定性。上述特性使mTG有更為廣闊的應用范圍。?

微生物來源的TGase屬于胞外酶，可直接分泌到培養基中·分離純化較動植物來源的TGase容易，并且微生物發酵原料廉價、產酶周期短，最適合進行大規模工業化生產，因此備受研究者的青睞。?