[發明專利]一種微生物谷氨酰胺轉胺酶及其制備的日常用止血產品

有效

• 申請號: 201410035709.5
• 申請日: 2014-01-24
• 公開（公告）號: CN103820411A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 易正芳;呂方;裴正培;劉明耀
• 申請（專利權）人: 華東師范大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;A61K38/45;A61P7/04;A61P17/02;A61K38/39
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

1.一種新的微生物谷氨酰胺轉胺酶mTG，其特征在于，該mTG與野生型mTG相比發生了四個位點的氨基酸突變，即S23A、G73Y、K317Q、K325Q。

2.如權利要求1所述的谷氨酰胺轉胺酶mTG，其特征在于，該酶具有如SEQ?ID?NO：3所述的基因編碼的蛋白序列；或者，具有如SEQ?ID?NO：4所述的蛋白序列。

3.如權利要求1所述的谷氨酰胺轉胺酶mTG，其特征在于，該酶電泳純度為至少90％以上，比活性大于25U／毫克，優選地，純度為95％以上，且比活性大于25U／毫克；其中該酶的最適反應溫度在25-45攝氏度之間。

4.用于編碼權利要求1-3之任一項所述酶的基因序列。

5.一種日常生活創傷失血的快速止血產品，其特征在于，該產品中包含權利要求1-3之任一項所述的酶為主活性基質，或者包含權利要求4的基因所編碼的酶為主要活性基質。

6.如權利要求5所述的止血產品，其特征在于，包括貼劑、膏劑(軟膏劑、硬膏劑)、糊劑、搽劑。

7.如權利要求6所述的止血產品，其特征在于，所述貼劑的基質包括含有活性谷氨酰胺轉胺酶成分的藥芯(即儲藥層)、將藥芯固定在傷口上的粘附層。

8.如權利要求7所述的止血產品，其特征在于，所述貼劑包括創可貼、ok繃、止血綁帶。

9.如權利要求8所述的止血產品，其特征在于，所述創可貼、ok繃、止血綁帶包括固定透氣膠帶，并且其所用粘附層、固定透氣膠帶均為市場上通用品；其中所述創可貼、ok繃、止血綁帶的透氣膠帶包括現有任何膠帶，例如PVP膠帶、彈力布、PU膠帶、氧化鋅膠布，以及任何對皮膚無傷害的彈性膠帶。

10.如權利要求9所述的止血產品，其特征在于，所述藥芯包括或不包括具有止血和促進傷口愈合功能的明膠。

11.如權利要求6所述的止血產品，其特征在于，所述膏劑、糊劑、搽劑的基質選自不具有止血和促進傷口愈合功能的藥學上可接受的輔料；所述膏劑包括軟膏劑、硬膏劑。

12.如權利要求11所述的止血產品，其特征在于，其中膏劑的藥學上可接受的輔料包括易被皮膚吸收的軟性基質，以橡膠為主要基質并與樹脂、脂肪或類脂性物質形成的硬性基質；其中，軟性基質包括凡士林、液狀石蠟、羊毛脂、蜂蠟、動物油、植物油、單硬質酸甘油酯、十八醇之任一種或其任意混合物。

13.如權利要求11所述的止血產品，其特征在于，其中所述搽劑的藥學上可接受的輔料包括乙醇、油或適當的溶劑形成的基質；其中，所述油包括動物油、植物油或礦物油，所述溶劑包括生理鹽水、或與生理鹽水等滲的緩沖液。

14.如權利要求5-13之任一項所述的止血產品，其中以上所述基質包括或不包括明膠。

15.制備上述任一項權利要求中所述日常生活創傷失血的止血產品的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備能表達所述微生物谷氨酰胺轉胺酶的重組微生物，并進行重組表達；

(2)收集并純化具有所述活性的谷氨酰胺轉胺酶，并配置成活性溶液；

(3)通過常規方法，將所述谷氨酰胺轉胺酶的活性溶液添加在不具有止血和促進傷口愈合功能的基質上；

(4)將所述基質進行常規處理，即得到所述日常生活創傷失血的止血產品。

16.如權利要求15所述的方法，其特征在于，所述止血產品包括貼劑、膏劑、糊劑、搽劑；其中膏劑包括軟膏劑、硬膏劑。

17.如權利要求16所述的方法，其特征在于，所述止血產品為貼劑，其中通過噴灑、涂布或浸泡方法將所述微生物谷氨酰胺轉胺酶溶液添加在所述藥芯上，并將藥芯附加在粘附層上，經擠壓、干燥、分割，得到貼劑。

18.如權利要求17所述的方法，其特征在于，所述微生物谷氨酰胺轉胺酶溶液為25U／ml～300U／ml；其中，所述干燥溫度不超過50℃。

19.如權利要求16所述的方法，其特征在于，通過將所述微生物谷氨酰胺轉胺酶溶液與不具有止血和促進傷口愈合功能的藥學上可接受的輔料進行混勻，直至制備成膏劑或糊劑、搽劑，所述混勻方法包括機械混勻、加熱混勻、乳化混勻。

20.如權利要求15-19之任一項所述的方法，其特征在于，所述基質包括或不包括明膠。