[發(fā)明專利]抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸的制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410035528.2 | 申請日： | 2014-01-24 |
| 公開（公告）號： | CN104805082A | 公開（公告）日： | 2015-07-29 |
| 發(fā)明（設計）人： | 張辰宇 | 申請（專利權）人： | 江蘇命碼生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/10;C12N15/85;C12N15/867;A61D19/04;A01K67/027 |
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| 地址： | 225300 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 抗丙型 肝炎 病毒 干擾 核糖核酸 制備 方法 | ||
1.一種用于生產(chǎn)抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸的生物反應器的制備方法，該制備方法包括以下步驟：
(1)構(gòu)建包含編碼抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸的基因序列的載體；
(2)將步驟(1)構(gòu)建的載體導入乳牛受體細胞，所述受體細胞為受精卵細胞、胚胎干細胞或早期胚胎；
(3)利用步驟(2)制得的乳牛受體細胞通過假孕乳牛發(fā)育并獲得轉(zhuǎn)基因乳牛。
2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述載體還包含一種或多種選自半乳糖基因啟動子、β-酪蛋白啟動子、β-乳球蛋白啟動子、sl-酪蛋白基因啟動子、乳清酸蛋白啟動子和乳清蛋白基因啟動子的基因序列。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：
(1)構(gòu)建包含編碼抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸的基因序列的載體；
(2)將步驟(1)構(gòu)建的載體導入乳牛受精卵細胞；
(3)將步驟(2)制得的乳牛受精卵細胞置于假孕乳牛輸卵管中發(fā)育并獲得轉(zhuǎn)基因乳牛。
4.根據(jù)權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：
(1)構(gòu)建包含編碼抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸的基因序列的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體；優(yōu)選地，所述抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸連接在逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA的LTR下部；更優(yōu)選地，將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體包裝成高滴度病毒顆粒；
(2)將步驟(1)構(gòu)建的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導入乳牛受精卵細胞；
(3)將步驟(2)制得的乳牛受精卵細胞置于假孕乳牛輸卵管中發(fā)育并獲得轉(zhuǎn)基因乳牛。
5.根據(jù)權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：
(1)構(gòu)建包含編碼抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸的基因序列的載體；
(2)將步驟(1)構(gòu)建的載體導入乳牛胚胎干細胞；
(3)將步驟(2)制得的乳牛胚胎干細胞與乳牛胚囊細胞混合(例如通過囊胚腔注射混合)，置于假孕乳牛子宮中發(fā)育并獲得轉(zhuǎn)基因乳牛；優(yōu)選地，可以再利用生殖系嵌合子代設計進行交配育種獲得純系。
6.一種抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸的制備方法，該制備方法包括以下步驟：
(1)構(gòu)建包含編碼抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸的基因序列的載體；
(2)將步驟(1)構(gòu)建的載體導人受體細胞，所述受體細胞為乳牛受精卵細胞、胚胎干細胞或早期胚胎；
(3)利用步驟(2)制得的乳牛受體細胞通過假孕乳牛發(fā)育并獲得轉(zhuǎn)基因乳牛；
(4)從步驟(3)制得的轉(zhuǎn)基因乳牛分泌的牛乳中獲得抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸。
7.根據(jù)權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述載體還包含一種或多種選自半乳糖基因啟動子、β-酪蛋白啟動子、β-乳球蛋白啟動子、sl-酪蛋白基因啟動子、乳清酸蛋白啟動子和乳清蛋白基因啟動子的基因序列。
8.根據(jù)權利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：
(1)構(gòu)建包含編碼抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸的基因序列的載體；
(2)將步驟(1)構(gòu)建的載體導人乳牛受精卵細胞；
(3)將步驟(2)制得的乳牛受精卵細胞置于假孕乳牛輸卵管中發(fā)育并獲得轉(zhuǎn)基因乳牛；
(4)從步驟(3)制得的轉(zhuǎn)基因乳牛分泌的牛乳中獲得抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸。
9.根據(jù)權利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：
(1)構(gòu)建包含編碼抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸的基因序列的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體；優(yōu)選地，所述抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸連接在逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA的LTR下部；更優(yōu)選地，將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體包裝成高滴度病毒顆粒；
(2)將步驟(1)構(gòu)建的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導入乳牛受精卵細胞；
(3)將步驟(2)制得的乳牛受精卵細胞置于假孕乳牛輸卵管中發(fā)育并獲得轉(zhuǎn)基因乳牛；
(4)從步驟(3)制得的轉(zhuǎn)基因乳牛分泌的牛乳中獲得抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸。
10.根據(jù)權利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：
(1)構(gòu)建包含編碼抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸的基因序列的載體；
(2)將步驟(1)構(gòu)建的載體導人乳牛胚胎干細胞；
(3)將步驟(2)制得的乳牛胚胎干細胞與乳牛胚囊細胞混合(例如通過囊胚腔注射混合)，置于假孕乳牛子宮中發(fā)育并獲得轉(zhuǎn)基因乳牛；優(yōu)選地，可以再利用生殖系嵌合子代設計進行交配育種獲得純系；
(4)從步驟(3)制得的轉(zhuǎn)基因乳牛分泌的牛乳中獲得抗丙型肝炎病毒小干擾核糖核酸。
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