[發(fā)明專利]一種蛋黃油中膽固醇的含量測(cè)定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410033729.9
• 申請(qǐng)日: 2014-01-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103728395A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王小妹;劉春芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州白云山漢方現(xiàn)代藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 廣州市深研專利事務(wù)所 44229
• 代理人: 姜若天

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥品與保健品領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種蛋黃油中膽固醇的含量測(cè)定方法。

背景技術(shù)

蛋黃油是雉科動(dòng)物家雞Gallus?gallus?domesticus?Brisson鮮卵的卵黃提取物^[1]，是雞蛋黃中脂溶性物質(zhì)的總稱，蛋黃油既可食用又有藥用價(jià)值?！都?yàn)方》、《日華子本草》、《本草綱目》、《醫(yī)林篆要》、《本草品匯精要》等著作中均有蛋黃油治療瘡、褥等疾病的記載^[2]。蛋黃油成分含量有較大差異，一般認(rèn)為，蛋黃油含脂肪類、蛋白質(zhì)氨基酸類、維生素、礦物質(zhì)四類成分，其中脂肪類又包括磷脂類和甾醇類，甾醇主要以膽固醇為主^[3]。膽固醇存在于動(dòng)物的所有組織中，是動(dòng)物維持正常生理活動(dòng)所必需的，但人體內(nèi)過(guò)多的膽固醇將引起高血脂，并進(jìn)而引發(fā)一系列的心血管疾病。目前，膽固醇真正具備工業(yè)化生產(chǎn)可能的方式只有通過(guò)動(dòng)物腦髓提取以及從羊毛脂中提取兩種方式來(lái)實(shí)現(xiàn)，但通過(guò)此方式生產(chǎn)出來(lái)的膽固醇成品存在瘋牛病等潛在安全風(fēng)險(xiǎn)，我司在進(jìn)行口服和注射等級(jí)別的蛋黃卵磷脂的研究，在此研究的同時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量的蛋黃油副產(chǎn)品，該副產(chǎn)品含膽固醇，為了分析測(cè)試蛋黃油中膽固醇的含量，開(kāi)發(fā)以蛋黃為來(lái)源的精制膽固醇原輔料，探索開(kāi)發(fā)低膽固醇蛋黃油，解決蛋黃油副產(chǎn)品出路問(wèn)題，建立一種快速、準(zhǔn)確的測(cè)定蛋黃油中膽固醇的含量的方法是十分必要的。

目前，對(duì)膽固醇的含量測(cè)定方法也主要是比色法、分光光度法和高效液相色譜法[4-6]，而通過(guò)高效液相色譜峰測(cè)定膽固醇含量的報(bào)道也只是對(duì)雞蛋黃進(jìn)行研究，因?yàn)榈包S油是雞蛋黃的提取物，是脂溶性物質(zhì)的總稱，雞蛋黃中膽固醇的含量測(cè)定方法不適用于蛋黃油中膽固醇含量的測(cè)定，因此，有必要建立一種科學(xué)的含量測(cè)定方法對(duì)蛋黃油中膽固醇的含量進(jìn)行測(cè)定，（參考文獻(xiàn)：[1]湖南省食品藥品監(jiān)督管理局，湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)；2009年版[S].長(zhǎng)沙，湖南科學(xué)技術(shù)出版社，2010:50-51.[2]王春林，唐漢鈞.蛋黃油醫(yī)用價(jià)值研究近況[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2005,12(6):100-102.[3]嚴(yán)建業(yè)，王璐，李順祥，胡珀，劉立娟.蛋黃油的現(xiàn)代研究進(jìn)展.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志.2012.19(3):106-110.[4]張佳程，駱承癢，黃赤男.直接皂化-比色法測(cè)定食品中膽固醇的研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2000,26:35-38.[5]郭福存，張禮華，王建國(guó)，等.蛋黃中膽固醇含量的快速測(cè)定方法[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志.1997,6-8.[6]張蓉真，李瓏，劉樹(shù)滔.測(cè)定雞蛋膽固醇的高效液相色譜新方法[J].色譜,1998,16:91-94.）

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種蛋黃油中膽固醇的含量測(cè)定方法，該方法利用高效液相色譜法測(cè)定了蛋黃油中的膽固醇的含量，為開(kāi)發(fā)以蛋黃來(lái)源的精制膽固醇提供原料的質(zhì)量分析方法，為開(kāi)發(fā)低膽固醇的蛋黃油提供了含量測(cè)定方法的技術(shù)支持，保證了蛋黃油中膽固醇含量測(cè)定方法的科學(xué)性和先進(jìn)性。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種蛋黃油中膽固醇的含量測(cè)定方法，包括如下步驟：

（1）供試品溶液的制備：

以蛋黃油為原料，取蛋黃油0.25g，置25ml量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（體積比2：1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液；

（2）膽固醇成分含量測(cè)定：

高效液相色譜實(shí)驗(yàn)條件如下：C₁₈色譜柱：150mm×3.9mm，5μm；柱溫：38℃；流動(dòng)相系統(tǒng)Ⅰ：以甲醇為流動(dòng)相A，以甲醇-異丙醇-正已烷(體積比10:70:20)為流動(dòng)相B；洗脫梯度：0-15min：100%A；15-17min：100%-40%A；17-27min：40%A；27-32min：40%-100%A；32-42min：100%A；洗脫時(shí)間：42min；流動(dòng)相系統(tǒng)Ⅱ：以甲醇為流動(dòng)相A，以甲醇-二氯甲烷(體積比50：50)為流動(dòng)相B；洗脫梯度：0-10min：100%A；10-20min：100%-50%A；20-25min：50%-100%A；25-30min：100%A；洗脫時(shí)間：30min；紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)：205nm；流速：0.8-1.2ml/min;柱溫：36-40℃；樣品進(jìn)樣量：10μl；

膽固醇成分含量測(cè)定方法如下：取膽固醇對(duì)照品，制成每1ml分別含0.2mg、0.4mg、0.6mg、0.8mg、1.0mg的對(duì)照品溶液；