[發明專利]一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法

有效

• 申請號: 201410032697.0
• 申請日: 2014-01-23
• 公開（公告）號: CN103788105A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 龔國利;趙婷峰
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C07D493/04
• 分類號: C07D493/04
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 蔡和平

技術領域

本發明涉及一種將膜過濾技術與分子印跡技術相結合的分離提取埃博霉素B的方法，具體涉及一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法。

背景技術

埃博霉素B(Epothilone?B)是微生物纖維堆囊菌產生的一類大環內酯類次級代謝產物，分子式為C₂₇H₄₁NO₆S，相對分子量為506.25，熔點為93℃-94℃，具有多種生物活性，可以作為抗生素藥物，是目前抗腫瘤藥物的一個研究熱點。

研究發現埃博霉素B不僅具有與紫杉醇相同的作用機制，可以促進GTP(三磷酸鳥苷)依賴性微管蛋白聚合形成微管，并且對微管有穩定作用。而且具有比紫杉醇更優越的特性，結構簡單，良好的水溶性和極大的藥用潛力，使得人們投入了巨大的熱情進行研究，以期更快的將其開發成為抗腫瘤藥物。研究者把很多的精力投入到對其合成及分離提取上，但是，對于埃博霉素的分離提純，目前所采用的方法都具有以下缺陷和不足：步驟過于繁瑣，使得操作的效率較低而過程費用很高，產物得率較低，成本較高，尤其是難以實現工業化的大規模生產。因而，研究能夠有效地分離純化埃博霉素的新方法，以降低埃博霉素的成本，具有十分重要的意義。

隨著生化分離技術的進步，各種先進的設備和工藝在生產中發揮越來越大的作用，特別是膜技術的發展和應用，使各種生化分離工藝大為改觀。膜過濾技術根據其孔徑大小，能阻攔溶液中的各種不同分子量的溶質與通常的方法相比，具有不經過相的轉換、不需要添加化學試劑、濾膜不易堵塞和耐用等優點，以達到濃縮或分離的目的。

分子印跡技術是近十幾年來分離領域中發展起來的一門新興技術。分子印跡聚合物對目標分子具有預定選擇性、特異性地識別，可將目標分子從混合溶液中分離出來。并且具有抗惡劣環境能力強、穩定性好、使用壽命長等優點，使得在藥物分離方法已有成功應用的實例。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法，其操作簡便，分離步驟少，選擇性高，分離效率較以往技術大幅提升，極大地降低了提純成本，并且適合于大規模的工業化生產。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

（1）樹脂對發酵液進行吸附：將纖維堆囊菌在液體培養基中進行發酵，并向液體培養基中加入經過處理的大孔樹脂，發酵120～150h后過濾得到吸附樹脂；其中，大孔樹脂的加入量為液體培養基體積的2-5%；

（2）乙酸乙酯浸提：用乙酸乙酯浸提吸附樹脂，收集浸提液；

（3）用超濾膜過濾浸提液：將浸提液采用截留分子量為1000～5000的超濾膜過濾以去除大分子雜質；并用乙酸乙酯洗濾，合并濾液，得粗提物；

（4）添加分子印跡聚合物：向粗提物中加入埃博霉素B分子印跡聚合物來特異性吸附埃博霉素B，在搖床上震蕩后離心并收集下層沉淀物，再用甲醇對沉淀物進行多次洗脫，收集洗脫液；其中，埃博霉素B分子印跡聚合物的加入量為粗提物體積的5～10%；

（5）結晶：將洗脫液進行真空濃縮，得淺黃色濃縮液；將濃縮液于-20～-10℃下進行低溫結晶，得到白色粉末狀結晶，即為埃博霉素B。

所述步驟（1）中纖維堆囊菌菌株號為ATCC25532或ATCC25569；液體培養基成分為土豆淀粉2.5～3.0g/L，蔗糖0.7～1.0g/L，葡萄糖0.2～0.5g/L，豆餅粉1.7～2.0g/L，MgSO₄·7H₂O2.3～2.5g/L，CaCl₂3.0～3.5g/L，EDTA-Fe³⁺2mL/L，微量元素0.5～1.0mL/L，pH值為7.2；大孔樹脂的型號為XAD-16大孔樹脂。

所述步驟（1）中大孔樹脂采用如下方法進行處理：首先，用3～5倍大孔樹脂體積的甲醇浸泡大孔樹脂，搖床震蕩12-16h后，取出倒掉甲醇，再用純水洗至無甲醇味；然后再用甲醇浸泡12-16h后，除去甲醇并用純水洗至無甲醇味。

所述步驟（2）中乙酸乙酯的用量為大孔樹脂體積的3～5倍，浸提的時間為24-48h。

所述步驟（3）中超濾膜的材質為聚砜、聚丙烯腈或聚酰胺。

所述步驟（3）中超濾膜過濾的壓力為0.1-0.6MPa，溫度0-40℃，流速為5-10mL/min。