[發明專利]一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法

有效

• 申請號: 201410032697.0
• 申請日: 2014-01-23
• 公開（公告）號: CN103788105A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 龔國利;趙婷峰
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: C07D493/04
• 分類號: C07D493/04
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 蔡和平

1.一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）樹脂對發酵液進行吸附：將纖維堆囊菌在液體培養基中進行發酵，并向液體培養基中加入經過處理的大孔樹脂，發酵120～150h后過濾得到吸附樹脂；其中，大孔樹脂的加入量為液體培養基體積的2-5%；

（2）乙酸乙酯浸提：用乙酸乙酯浸提吸附樹脂，收集浸提液；

（3）用超濾膜過濾浸提液：將浸提液采用截留分子量為1000～5000的超濾膜過濾以去除大分子雜質，得粗提物；

（4）添加分子印跡聚合物：向粗提物中加入埃博霉素B分子印跡聚合物來特異性吸附埃博霉素B，在搖床上震蕩后離心并收集下層沉淀物，再用甲醇對沉淀物進行多次洗脫，收集洗脫液；其中，埃博霉素B分子印跡聚合物的加入量為粗提物體積的5～10%；

（5）結晶：將洗脫液進行真空濃縮，得淺黃色濃縮液；將濃縮液于-20～-10℃下進行低溫結晶，得到白色粉末狀結晶，即為埃博霉素B。

2.根據權利要求1所述的一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（1）中纖維堆囊菌菌株號為ATCC25532或ATCC25569；液體培養基成分為土豆淀粉2.5～3.0g/L，蔗糖0.7～1.0g/L，葡萄糖0.2～0.5g/L，豆餅粉1.7～2.0g/L，MgSO₄·7H₂O2.3～2.5g/L，CaCl₂3.0～3.5g/L，EDTA-Fe³⁺2mL/L，微量元素0.5～1.0mL/L，pH值為7.2；大孔樹脂的型號為XAD-16大孔樹脂。

3.根據權利要求1所述的一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（1）中大孔樹脂采用如下方法進行處理：首先，用3～5倍大孔樹脂體積的甲醇浸泡大孔樹脂，搖床震蕩12-16h后，取出倒掉甲醇，再用純水洗至無甲醇味；然后再用甲醇浸泡12-16h后，除去甲醇并用純水洗至無甲醇味。

4.根據權利要求1所述的一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（2）中乙酸乙酯的用量為大孔樹脂體積的3～5倍，浸提的時間為24-48h。

5.根據權利要求1所述的一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（3）中超濾膜的材質為聚砜、聚丙烯腈或聚酰胺。

6.根據權利要求1所述的一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（3）中超濾膜過濾的壓力為0.1-0.6MPa，溫度0-40℃，流速為5-10mL/min。

7.根據權利要求1所述的一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（4）中埃博霉素B分子印跡聚合物的粒徑為40-60um；步驟（4）中搖床的轉速為100～160r/min，震蕩時間為24-48h；步驟（4）中離心是在室溫下以2500～3000r/min的轉速離心20～30min。

8.根據權利要求1所述的一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（4）中埃博霉素B分子印跡聚合物是由以下方法制得的：將埃博霉素B、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯按照摩爾比1:4:20混合均勻后，再溶解于體積比為4:1的乙醇和甲醇的混合溶液中，攪拌均勻后加入偶氮二異丁氰；充N₂反應12-14h后研磨得顆粒狀固體，最后用甲醇洗脫埃博霉素B；其中，偶氮二異丁腈與埃博霉素B的比為5mg：1mol。

9.根據權利要求1所述的一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，脫去埃博霉素B的分子印跡聚合物經過甲醇洗滌，然后真空干燥后還能夠作為埃博霉素B的特異性吸附劑在分離提取時加入，重復使用次數為2～5次。

10.根據權利要求1所述的一種基于分子印跡吸附技術的埃博霉素B分離提取方法，其特征在于，所述步驟（5）中濃縮的溫度40～45℃，真空度-0.085～-0.09MPa。