[發明專利]一種雞金銀羽位點基因型的分子鑒定方法

無效

• 申請號: 201410032115.9
• 申請日: 2014-01-23
• 公開（公告）號: CN103789305A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 龔炎長;王瑩;彭秀麗;李世軍;俸艷萍
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明涉及雞遺傳育種中分子標記應用領域，具體涉及一種雞金銀羽位點基因型的分子鑒定方法。

背景技術

初生雛雞的雌雄鑒別在養雞生產中有著重要的意義，在肉雞生產中雛雞出殼時鑒別雌雄有利于公母分養，便于根據公母不同的生長發育速度、營養需求給予不同的飼料和飼養管理條件，避免公雛發育快，搶食而影響母雛發育；在商品蛋雞生產中雛雞出殼時即淘汰公雛可節省飼養公雛的空間和成本，提高母雞的成活率和整齊度；對于種雞可通過鑒別雌雄、只出售不同品系單一性別的雛雞保護育種成果。雛雞的性別鑒定方法大體分為兩類：一類根據雌雄雛雞的生殖器官的差異，通過對生殖突起或性腺的直接觀察來鑒定，包括器械鑒別法、翻肛鑒別法等；另一類利用雞性連鎖基因的伴性交叉遺傳現象，使用帶有特定伴性基因基因型的品種或品系進行雜交生產自別雌雄配套系，通過雜交后代雛雞絨羽的顏色、淺色斑塊的大小或不同的羽毛生長速度來鑒別雛雞性別。自別雌雄相對直接觀察法（如翻肛法，器械鑒別法）有鑒別速度快，準確率高，不需要對鑒別人員進行專門的技術培訓，對雛雞損傷小，交叉感染疾病的可能性小的優點。目前在自別雌雄配套系生產中應用的伴性基因有快慢羽基因、金銀羽基因和橫斑基因。在利用這些基因的自別雌雄方法中，利用金銀羽基因自別雌雄可直接通過雛雞絨羽顏色區分雌雄，更為簡單直觀，沒有時間的限制，而且準確率更高，具有更好的利用價值。利用金銀羽基因進行自別雌雄時，使用金羽公雞與銀羽母雞交配，所生后代公雛絨羽為白色，母雛絨羽為紅色。目前金銀羽自別雌雄配套系已廣泛應用于來源于洛島紅—洛島白遺傳背景的褐殼蛋雞配套系中，但在其他遺傳背景的雞群中罕見應用，一個重要原因是金銀羽位點上等位基因的表達很大程度上受其他位點（如E位點等）上的修飾基因影響，因而在一些遺傳背景下很難準確鑒定個體金銀羽表型（進而鑒定基因型）。采用本發明的金銀羽位點基因型分子鑒定方法，可以在不同雞種群體中挑選出在金銀羽位點基因型不同的公雞和母雞進行繁育，從而達到在其他遺傳背景下也能利用金銀羽基因進行自別雌雄的目的。本發明建立的方法可以快速、簡便、準確的鑒定不同個體金銀羽位點上的基因型，有助于金銀羽自別雌雄技術更廣泛的推廣和應用。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種雞金銀羽位點基因型的分子鑒定方法，方法易行，操作簡便，在金銀羽自別雌雄配套系中，雛雞的絨羽顏色僅憑肉眼觀察確定，而銀羽雜合子和銀羽純合子表型相同，肉眼無法區分，而此分子鑒定方法可以區分雜合子和純合子。目前金銀羽自別雌雄配套系已廣泛應用于來源于洛島紅—洛島白遺傳背景的褐殼蛋雞配套系中，但在其他遺傳背景的雞群中罕見應用，一個重要原因是金銀羽位點上等位基因的表達很大程度上受其他位點上的修飾基因影響，因而在一些遺傳背景下很難準確鑒定個體金銀羽表型（進而鑒定基因型）。而此分子鑒定方法不受遺傳背景的限制，應用范圍廣泛。能夠鑒定出不同個體在金銀羽位點上的基因型。

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：

一種雞金銀羽位點基因型的分子鑒定方法，其步驟是：

A、利用軟件primer?premier?5.0，根據雞SLC45A2基因的DNA序列設計引物對M4-S/A，引物長度為22bp：M4-S：5'??ATCCCATTATCGCTGTCTGCAT??3'，M4-A：5'??AATCCGTGAAGAAGAGCATAGT??3'；一種分離的DNA序列，其序列為SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列。

B、以引物對M4-S/A為擴增引物建立15μL體系如下：1.5μL?10×EasyTaq?Buffer(+Mg²⁺)，0.3μL?正反引物（10μM），0.15μL的dNTP(2.5mM)，0.5U的Taq聚合酶，1μL的基因組DNA，加超純水補齊至15μL；反應程序為94℃預變性5min，94℃變性30s，53℃退火30s，72℃延伸30s，35個循環，72℃再延伸5min，15℃，1min，4℃下保存備用；

C、電泳檢測PCR產物：取?6?μL?PCR產物，加3μL?6×Loading?Buffer，制備濃度為1.2?%的瓊脂糖凝膠，點樣后，在120V電壓下電泳40min，溴化乙錠染色，凝膠成像儀檢測，根據條帶的有無及大小判定是否擴增成功。

D、限制性內切酶酶切：酶切的反應體系為：超純水3.6μL，10×bufferG?0.5μL，內切酶4U，PCR產物1μL。于37℃酶切16h。