[發(fā)明專利]金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細胞免疫優(yōu)勢表位肽及其制備方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410032033.4
• 申請日: 2014-01-23
• 公開（公告）號: CN103772493A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發(fā)明（設計）人: 吳超;趙卓;鄒全明;李濱;孫合強;陳立;章金勇;魏姍姍;胡健;曾浩;王逸麟
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學
• 主分類號: C07K14/31
• 分類號: C07K14/31;G01N33/68;A61K39/085;A61P31/04
• 代理公司: 重慶志合專利事務所 50210
• 代理人: 胡榮琿

技術領域

本發(fā)明涉及生物制藥領域，特別是涉及來自金黃色葡萄球菌腸毒素B的三個B細胞免疫優(yōu)勢表位、鑒定此B細胞免疫優(yōu)勢表位的方法以及其在醫(yī)藥生物技術領域的應用。?

背景技術

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus?aureus，S.aureus），作為革蘭氏陽性菌的代表，是一類在自然界廣泛存在的致病性球菌，也是引起醫(yī)院感染和社區(qū)感染的一種重要致病菌。調查研究表明，在美國，社區(qū)皮膚及軟組織感染最常見的病原菌為S.aureus（約占75%）；在日本，膿皰病中S.aureus引發(fā)的大皰性膿包病占的92%；在非洲，熱帶膿性肌炎病原體中S.aureus占55%～72%；在中國，感染性心內膜炎的頭號致病菌為S.aureus（占31%～34%）。此外，S.aureus感染以急性、化膿性為特征，局部可引起皮膚和軟組織等的化膿性感染，經久不愈；全身可導致骨髓炎、膿毒性關節(jié)炎、心內膜炎、肺炎、膿毒血癥等嚴重感染及并發(fā)癥，死亡率高達20％。同時，金葡菌的外毒素還可引起食物中毒、燙傷樣皮膚綜合征和中毒性休克綜合征等全身致死性感染。?

金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，在含有血液和葡萄糖的培養(yǎng)基中生長更佳，需氧或兼性厭氧。28℃～38℃均能生長，最適溫度為37℃，pH為4.8～9.4，最適為7.4。耐鹽性強，在含10%～15%氯化鈉培養(yǎng)基中均能生長。在血脂平板上形成的菌落較大，菌落周圍形成明顯的全透明溶血環(huán)（β-溶血），溶血性菌株具有較強致病性。按照噬菌體分型，金黃色葡萄球菌可分為5群26個型。噬菌體分型在流行病學調查時追蹤傳染源及研究菌型與疾?病種類間的關系上均有重要意義。腸毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金黃色葡萄球菌引起，Ⅱ群菌對抗生素產生耐藥性的速度比Ⅰ和Ⅳ群緩慢很多。造成醫(yī)院感染嚴重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。引起皰疹性和剝脫性皮炎的菌株經常是Ⅱ群71型。?

金黃色葡萄球菌耐熱性腸毒素（Staphylococcal?enterotoxin，SE），是引起人類食物中毒、全身炎癥反應和膿毒癥休克的主要原因，也是金黃色葡萄球菌疫苗研究最重要的保護性抗原之一。SE因血清型差異SE分為SEA、SEB及SEC等多種型，每株臨床MRSA分離株可分泌1-2種腸毒素，其中SEB，SEC及TSST-1最豐富。每株金黃色葡萄球菌能產生一型或兩型以上的腸毒素。近年發(fā)現，造成醫(yī)院感染的耐甲氧西林金葡菌，80％以上產生腸毒素B（Staphylococcal?enterotoxin?B，SEB）。個別醫(yī)院分離株幾乎100％產SEB。?

金葡菌SEB屬于超抗原，不需要抗原呈遞細胞的加工處理，以完整的蛋白質分子直接與在MHCⅡ類分子的α₁結構域和TCR的β鏈V區(qū)結合，從而刺激T細胞活化增殖，釋放大量細胞因子如IL-2、IFN-γ及TNF-α。由金葡菌SEB引起的中毒性休克綜合征的病死率可達50%，而與流感并發(fā)的金葡菌SEB感染其死亡率可達90%以上，因此，氣溶膠中的金葡菌SEB是一種潛在的生化武器。當SEB進入機體后，其超抗原的結合引起單個核細胞活化，導致廣泛的細胞因子釋放，而早期的TCR-αβT細胞釋放的TNF-α對死亡的發(fā)生起了重要的作用。?

經Blast比對證實，SEB在MRSA各菌株中序列保守，結構穩(wěn)定。在小鼠模型中的研究證實，SEB具有比其他抗原更好的體液應答優(yōu)勢，合成的人SEB單克隆抗體可預防MRSA感染常見的毒性休克綜合癥。但SEB本身為毒素，用于人體存在安全隱患，因此，失去毒性的突變體SEB是MRSA疫苗較好的保護性抗原。目前，SEB突變體疫苗用于SEB中毒及抗MRSA感染已在動物模型中獲得成功。?