[發(fā)明專(zhuān)利]金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410032033.4
• 申請(qǐng)日: 2014-01-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103772493A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳超;趙卓;鄒全明;李濱;孫合強(qiáng);陳立;章金勇;魏姍姍;胡健;曾浩;王逸麟
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/31
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/31;G01N33/68;A61K39/085;A61P31/04
• 代理公司: 重慶志合專(zhuān)利事務(wù)所 50210
• 代理人: 胡榮琿

1.一種金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：17所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽，其特征在于，所述B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽的核心表位的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：48所示。

3.一種金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：35所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽，其特征在于，所述B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽的核心表位的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：54所示。

5.一種金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：42所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽，其特征在于，所述B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽的核心表位的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：69所示。

7.一種鑒定權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽的方法，其特征在于，包含步驟：

1）用金黃色葡萄球菌腸毒素B的突變體免疫小鼠獲得抗血清；

2）步移合成覆蓋金黃色葡萄球菌腸毒素B全長(zhǎng)序列的重疊18肽；

3）用步驟1）所得的抗血清結(jié)合步驟2）所得的重疊18肽篩選金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽；

4）用步驟3）所篩得的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽與鑰孔血藍(lán)蛋白偶聯(lián)，所得偶聯(lián)物用于動(dòng)物免疫，獲得免疫優(yōu)勢(shì)肽抗血清；所述免疫優(yōu)勢(shì)表位抗血清進(jìn)行金黃色葡萄球菌腸毒素B的中和能力檢測(cè)，鑒定所述B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽為目標(biāo)B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，進(jìn)一步包含步驟：

5）針對(duì)步驟3）所得的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽序列，從N-端及C-端分別依次截?cái)?個(gè)氨基酸，合成各B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽所對(duì)應(yīng)的截?cái)嚯模?/p>

6）用步驟4）獲得的所述免疫優(yōu)勢(shì)肽抗血清結(jié)合步驟5）所述的截?cái)嚯模瑏?lái)確定所述B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽的最小表位；

7）用步驟6）所篩得的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽的最小表位與鑰孔血藍(lán)蛋白蛋白偶聯(lián)，所得偶聯(lián)物用于動(dòng)物免疫，獲得免疫優(yōu)勢(shì)表位抗血清；

8）用步驟7）獲得的所述免疫優(yōu)勢(shì)表位抗血清進(jìn)行金黃色葡萄球菌腸毒素B的中和能力檢測(cè)；

9）用生物信息學(xué)方法確定步驟6）所確定的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽的最小表位在金黃色葡萄球菌各個(gè)菌株中的保守性，并明確其在金黃色葡萄球菌腸毒素B蛋白三維結(jié)構(gòu)中的位置。

9.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽在制備金黃色葡萄球菌腸毒素B表位疫苗和/或預(yù)防疫苗中的應(yīng)用。

10.一種金黃色葡萄球菌腸毒素B表位疫苗和/或預(yù)防疫苗，其特征在于，含有權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的金黃色葡萄球菌腸毒素B的B細(xì)胞免疫優(yōu)勢(shì)表位肽。