[發明專利]一種水環境中十種雌激素的共檢測技術

有效

• 申請號: 201410031449.4
• 申請日: 2014-01-23
• 公開（公告）號: CN103792314A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 羅專溪;王大鵬;張嫻;顏昌宙;林立峰
• 申請（專利權）人: 中國科學院城市環境研究所
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種運用液相色譜串聯質譜儀同時測定水環境中雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，雙酚A等十種雌激素的方法。?

背景技術

環境雌激素是一種外源性物質，能夠模擬和干擾人或動物體內雌激素的正常合成、運輸、結合等過程，能對機體的生殖系統，免疫系統和生殖系統造成影響。環境中存在的雌激素主要包括天然雌激素如雌酮（Estrone，E1），17β-雌二醇（17β-Estradiol，E2）和雌三醇（Estriol，E3）以及人工合成雌激素如乙炔雌二醇（17α-Ethynylestradiol,EE2），壬基酚（4-n-Nonylphenol，NP），辛基酚（4-tert-Octylphenol，OP），戊酸雌二醇（17-beta-Estradiol?17-valerate，EV），己烯雌酚（Diethylstibestrol，DES），己烷雌酚（Hexestrol，HEX），雙酚A（Bisphenol?A）等，種類豐富。人和動物的每天都會排出天然雌激素，據報道，成年男性每天排出雌酮5μg，而女性每天排出的17β-雌二醇和雌酮分別為2-12μg和3-20μg。人工合成雌激素如乙炔雌二醇被用作避孕藥被大量使用，當被排入水體中也會對水體造成影響。研究表明，即使在極低的濃度，這些雌激素也會對水體中的魚類等生物產生性別干擾，如雄魚雌性化，并會引起人類的疾病。?

近年來雌激素引起水體中魚類雌性化的現象越來越引起人們的關注，而采用現代的檢測技術來對水體的痕量雌激素的檢測顯得尤為重要。檢測雌激素的方法有很多，但能同時檢出的雌激素種類還較少。主流檢測手段有氣相色譜（GC）和液相色譜（LC），特別是它們與質譜聯用液相色譜串聯質譜（LC-MS/MS）與氣相色譜（GC/MS）相比，無需衍生化，耗時少。建立重現性好，回收率和靈敏度高，多種雌激素同時檢出的檢測方法十分重要。?

發明內容

本發明是針對自然水體中的雌激素的含量，擬開發一種回收率高，快速，準確地同時測量雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，雙酚A等十種雌激素的技術。?

本發明的技術方案如下：?

一種同時測量雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，雙酚A十種雌激素法定方法，該方法的步驟如下步驟：

（1）水樣前處理

將采集的水樣用0.45?μm孔徑的濾膜過濾并將pH值調至3.0。量取1.0?L的水樣，用Waters公司的C18（6?mL，200?mg）固相萃取小柱對水樣進行富集，速度控制在10ml/min。固相萃取小柱使用前進行活化，條件為，先后用6?mL乙酸乙酯，6mL甲醇和6?mL?pH=3的鹽酸水溶液預處理。待富集結束后，用6mL?10%(v/v)的甲醇水溶液洗柱去除其它雜質，然后抽真空干燥20?min以去除水分。干燥后，用6?mL的乙酸乙酯將目標化合物洗脫至氮吹管中，用溫和的氮氣流將其吹干。將樣品轉移至樣品瓶中并保存在4℃的冰箱中待測；

（2）使用液相色譜串聯質譜儀檢測雌激素濃度

色譜柱：Thermo?Accucore?C18,?100×2.1mm，粒徑2.6μm；

流動相及梯度洗脫條件：流動相為0.5%的氨水（流動相A）和純甲醇（流動相B），梯度洗脫條件為，流動相B的比例在前2min內保持在20%，2-8min內從20%升到60%，8-13min內從60%繼續增加到90%，13-16min內維持在90%，16-16.1min從90%降至20%，16.1-20min內維持在20%不變；

（3）標準曲線的繪制，以外標法繪制標準曲線；

（4）樣品含量的測定：

將采集的水樣按照1）的方法進行前處理，按照2）所述的條件進行雌激素的測定，并用3）中的方法計算雌激素的含量。

本發明所述的方法還包括采用Milli-Q超純水，添加濃度為200μg/L，500μg/L的十種目標混合標樣，安裝（4）所述的含量測定方法，測定各雌激素的濃度。?

本發明所述的雌激素為雌酮，17β-雌二醇，雌三醇，乙炔雌二醇，壬基酚，辛基酚，戊酸雌二醇，己烷雌酚，己烯雌酚，雙酚A。?