[發明專利]一種TAZ敲低或過表達的PC9細胞株及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 201410030314.6
• 申請日: 2014-01-22
• 公開（公告）號: CN103849620A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 許偉;吳劍卿;程雁
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學第一附屬醫院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種TAZ敲低PC9或過表達細胞株及其構建方法和應用。?

背景技術

肺癌是世界上發病率和死亡率最高的惡性腫瘤。非小細胞肺癌（non-small?cell?lung?cancer，NSCLC）占肺癌的75%-85%，確診時多屬中晚期（Ⅲb和Ⅳ期），失去手術時機，經過綜合治療，5年生存率僅為5%-10%。目前，針對表皮生長因子受體（epidermal?growth?factor?receptor，EGFR）的酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine?kinase?inhibitors，TKIs）不僅口服方便、毒性低、耐受性良好，而且提高患者的生活質量、延長選擇性患者的生存時間，在晚期肺癌的治療中發揮了重要作用。然而，臨床研究發現，EGFR-TKIs治療的原發性耐藥以及所有接受治療患者最終發生的獲得性耐藥，成為限制藥物療效的瓶頸。?

肺癌EGFR-TKIs耐藥的分子機制多重復雜。EGFR基因自身的突變或擴增、其他受體酪氨酸激酶活化、EGFR信號下游信號分子改變等，這些效應的多樣性使得逆轉耐藥治療異常復雜且難以實現。近年來，隨著具有特異表面標志腫瘤干細胞（cancer?stem?cells，CSCs）的發現，CSCs在肺癌發生發展、侵襲衍進、治療療效和腫瘤耐藥方面的根源作用被不斷證實。研究提示腫瘤細胞“干性（stemness）”的獲得，如腫瘤球（tumorsphere）的形成以及上皮細胞間質改變（epithelial-mesenchymal?transition，EMT）等，是EGFR-TKIs耐藥和腫瘤復發的始作俑者。進一步研究提示：調節腫瘤干細胞自我更新相關的信號通路——如Notch，Wnt，Sonic?hedgehog和Hippo——異常激活和/或轉錄因子異常表達在腫瘤耐藥的調控中發揮重要的作用。?

新近的研究提示：在細胞增殖凋亡、組織穩態維持及干細胞的自我更新等過程發揮重要作用的抑癌通路——Hippo，調控多種CSCs形成，并與EGFR信號通路在腫瘤發生過程中存在緊密聯系的交互作用。Hippo通路是首先在果蠅中發現的一個新的信號轉導通路，是細胞增殖和凋亡的控制開關；其核心部分由一個級聯的激酶系統構成，通過轉錄共活化因子Yorkie的磷酸化調節基因表達，從而在果蠅發育過程中發揮控制細胞數量和器官大小的關鍵作用；該機制的失效將誘發組織過度生長和腫瘤形成。在哺乳動物細胞中存在和果蠅高度保守的Hippo通路，構成該信號通路的各編碼基因在多種人類腫瘤?組織中存在異常表達或突變。小鼠模型中，干擾Hippo或EGFR信號產生類似的組織過度增長效應，兩種效應的重疊表明Hippo和EGFR通路的緊密聯系。有研究發現，EGFR下游兩個效應旁路MAPK和PI3K間接控制Hippo信號級聯上游激酶Mst1/2的活性。同時，Hippo下游關鍵轉錄因子，即具有PDZ-結合模序的轉錄共激活因子（transcriptional?co-activator?with?PDZ-binding?motif，TAZ又稱WWTR1）和Yes相關蛋白（Yes-associated?protein，YAP），誘導EGFR配體表達，激活EGFR信號，影響EGFR-TKIs藥物敏感性。?