[發明專利]乳腺癌特異抗原表位多肽負載的樹突狀細胞疫苗制備及其試劑盒

在審

• 申請號: 201410030180.8
• 申請日: 2014-01-22
• 公開（公告）號: CN103784950A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 沈麗;黃啟明;郝麗敏
• 申請（專利權）人: 北京弘潤源生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61P35/00;C12N5/0784
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種乳腺癌特異抗原表位多肽負載的樹突狀細胞疫苗的制備方法，其特征在于，所述方法包括采用鑒定的乳腺癌特異表達的人類表皮生長因子受體2、乳腺癌耐藥蛋白和IQ基序與Sec7結構域1蛋白的人白細胞抗原A201陽性表位多肽，即SEQ?ID?NO.1-6中任一項所示的氨基酸序列組成的多肽，負載樹突狀細胞，可引發特異性的靶向乳腺癌的細胞毒性T淋巴細胞反應。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述樹突狀細胞疫苗為由SEQ?ID?NO.1-6中人類表皮生長因子受體2、乳腺癌耐藥蛋白和IQ基序與Sec7結構域1蛋白中任一項以上抗原表位多肽負載的樹突狀細胞。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述樹突狀細胞疫苗，優選地由SEQ?ID?NO.1-6中人類表皮生長因子受體2、乳腺癌耐藥蛋白和IQ基序與Sec7結構域1蛋白三項抗原表位多肽組成的多肽組合物負載。

4.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述樹突狀細胞通過以下方法獲取：

取100mL外周血經Ficoll-Hypaque密度梯度離心，得到單個核細胞；外周血單個核細胞用RPMI1640培養基重懸，并加入6孔板中貼壁；

在37℃、5％CO₂培養箱中孵育90min后，未貼壁細胞洗滌收集下來，用于誘導CIK細胞；貼壁細胞加入完全培養基RPMI1640誘導培養，含有5％的自體血清、2000IU／mL重組人粒細胞巨噬集落刺激因子和1500IU／mL?IL-4；

在培養到第三天時細胞更換新鮮培養基；

培養到第五天收獲未成熟樹突狀細胞(DCs)；成熟DCs采用完全RPMI1640培養基再誘導到第七天得到，含0.1μg／mL脂多糖和20ng／mL腫瘤壞死因子α。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述負載DCs通過以下方法獲取：

培養5天后，3×106個未成熟DCs用HER2／NEU、BCRP和GEP100蛋白SEQ?ID?NO.1-6中一項以上抗原表位多肽組合物在37℃、5％CO₂培養箱中負載2小時；抗原負載的DCs通過離心收獲得到；所得DCs經生理鹽水洗滌3次，后重懸到生理鹽水中，至濃度為3×10⁶成熟DC／mL，并添加終濃度為質量體積比2％的人血白蛋白，從而制備成負載的DC疫苗。

6.一種含權利要求1-5中任一項所述的制備乳腺癌特異抗原表位多肽負載的樹突狀細胞疫苗的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

1)樹突狀細胞基礎培養基；

2)SEQ?ID?NO.1-6中人類表皮生長因子受體2、乳腺癌耐藥蛋白和IQ基序與Sec7結構域1蛋白中任一項以上抗原表位多肽；

3)巨粒細胞-噬細胞集落刺激因子；

4)白介素-4、脂多糖和腫瘤壞死因子α；以及

5)使用說明書；

其中，所述使用說明書包括權利要求1-5任一項所述的方法。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒，優選地包括由SEQ?ID?NO.1-6中人類表皮生長因子受體2、乳腺癌耐藥蛋白和IQ基序與Sec7結構域1蛋白三項抗原表位多肽組成的多肽組合物。

8.一種根據權利要求1-7中任一項所述的樹突狀細胞疫苗在制備治療乳腺癌藥物中的應用。