[發明專利]一種高溫甘露聚糖酶ManAHr的制備方法及其基因和應用

有效

• 申請號: 201410029518.8
• 申請日: 2014-01-22
• 公開（公告）號: CN103789282A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 詹志春;熊海容;王亞偉;周櫻
• 申請（專利權）人: 武漢新華揚生物股份有限公司
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/56;C12N15/63;C12N1/19;C12R1/84
• 代理公司: 武漢華旭知識產權事務所 42214
• 代理人: 周宗貴;劉榮

1.一種高溫甘露聚糖酶ManAHr，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.一種編碼權利要求1所述高溫甘露聚糖酶ManAHr的基因，其特征在于：其堿基序列如SEQ?ID?NO.2所示。

3.一種包含有權利要求2所述基因的重組表達質粒pPIC9K-ManAHr。

4.一種包含有權利要求2所述基因的重組畢赤酵母菌株ManAHr-GS115。

5.權利要求1所述高溫甘露聚糖酶ManAHr的制備方法，其特征在于包括以下步驟：（1）、依據耐熱甘露聚糖酶ManA3d的基因序列，在不改變其氨基酸序列的條件下，對其進行基因重排和優化密碼子，去除畢赤酵母稀有密碼子，并提高mRNA的二級結構穩定性，獲得優化的甘露聚糖酶ManAHr基因，其基因序列如SEQ?ID?NO.2所示；（2）、將步驟（1）中甘露聚糖酶ManAHr基因的5'端和3'端位置分別設計EcoR?I和Not?I酶切位點，完成全基因合成后插入表達載體pPIC9K，構建重組質粒pPIC9K-ManAHr；（3）、將步驟（2）中重組質粒pPIC9K-ManAHr采用Dra?I線性化該重組質粒后，轉化畢赤酵母GS115感受態細胞，并篩選獲得產酶最高的重組畢赤酵母菌株ManAHr-GS115；（4）、將步驟（3）中重組畢赤酵母菌株ManAHr-GS115接種于畢赤酵母發酵培養基，并維持甲醇誘導產酶，從而獲得甘露聚糖酶ManAHr。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（2）和步驟（4）中所述的甘露聚糖酶ManAHr被分泌至胞外培養液中。

7.權利要求1所述的高溫甘露聚糖酶ManAHr，在飼料、食品、造紙、洗滌和醫藥中的應用。