[發明專利]一種響應面法優化漿水的制備方法

在審

• 申請號: 201410029173.6
• 申請日: 2014-01-22
• 公開（公告）號: CN103798703A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 劉曄瑋;張培;邸多隆
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: A23L1/218
• 分類號: A23L1/218;A23L1/105
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

1.一種響應面法優化漿水的制備方法，包括以下步驟：

⑴蔬菜制備：分別將芹菜、蓮花菜洗凈后切段，并按等質量的比例放入罐中；

⑵面湯制備：將面粉與溫度為90~100℃的水分別按水平梯度為1kg：60mL、1?kg：80?mL、1?kg：100?mL的比例配制成面湯；

⑶在放有所述蔬菜的罐中分別按為水平梯度為1?kg：20?mL，1?kg：30?mL，1?kg：40?mL的比例加入所述面湯，并分別按水平梯度為5%、7%、9%的接種量接入混合菌，在溫度為20~40℃的條件下發酵4~6天，即可得到對應于不同接種量、面粉/水和蔬菜/面湯的比例的漿水；

⑷實驗設計與統計分析：

①單因素試驗：

依次改變接種量、面粉/水和蔬菜/面湯的比例，以DPPH·清除率、活菌數、總酸為測定指標，然后按照下式計算其綜合指標：

其中：活菌數測定采用稀釋平板法測定樣品中活菌數，稀釋度為10^-6、10^-8；

每個稀釋度做3個重復；將上述平板在30℃恒溫培養箱培養24h，數菌落總數；

酸度測定：

稱取25g試液，置于250ml三角瓶中，加40ml水及0.2ml1%的酚酞指示劑；

用0.1mol/L氫氧化鈉標準滴定溶液滴定至微紅色30s不不退色，記錄消耗0.1mol/L氫氧化鈉標準滴定溶液的體積的數值，記作V₁，同一樣品測定兩次；空白試驗：用水代替試液，按上述步驟操作，記錄消耗0.1mol/L氫氧化鈉標準滴定溶液的體積的數值，記作V₂；然后按下式計算總酸：

式中：

X——食品中總酸的質量分數以X計，數值以克每千克,g/kg(或g/L)表示；

C——氫氧化鈉標準滴定溶液的濃度，mol/L：

V₁——滴定試液時消耗氫氧化鈉標準滴定溶液的體積，mL；

V₂——空白試驗時消耗氫氧化鈉標準滴定溶液的體積，mL；

F——試液的稀釋倍數；

K——酸的換算系數；其中各種酸的換算系數分別為：蘋果酸0.067；乙酸0.060；酒石酸0.075；檸檬酸0.064；含一分子結晶水的檸檬酸0.070()；乳酸0.090；鹽酸0.036；磷酸0.049；

m?——試樣的質量，g；

DPPH·清除率的測定：

首先精密稱取DPPH·標準品8mg，置于100?mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，即得濃度為2×10^-4mol/L的DPPH·標準儲備液，在4~10℃下低溫避光保存備用；然后將所述儲備液與甲醇按3mL：5mL的比例混合均勻后，即得工作液；其次，將甲醇與所述工作液按1mL：3mL的比例混合均勻后，利用紫外-可見分光光度法于517?nm處測定吸光度值，記為A_空白=0.681；最后，將發酵成熟的漿水與甲醇按1mL：3mL的比例混合均勻后，取10mL漿水在8000?r/min下離心10?min，得到上清液，該上清液與所述工作液按1mL：3mL的比例混合均勻后，常溫避光反應20?min，于517?nm處測吸光度值記為A_樣品，平行測定2次，按以下公式計算DPPH·清除率：

；

②響應面法優化設計：

根據單因素試驗結果，以接種量、面粉/水和蔬菜/面湯的比例這3個因素，利用Design?Expert?8.0軟件根據Box-Behnken設計原則進行實驗設計，以面粉/水X₁、蔬菜/面湯X₂和接種量X₃為自變量，以綜合指標為響應值y，建立多元二次回歸方程：

Y=69.08+3.30X₁+11.27?X₂+9.99?X₃+3.92?X₁?X₂+5.93?X₁?X₃-2.31?X₂?X₃-9.18?X₁²-4.43?X₂²-8.44?X₃²；

⑸實驗結果分析與優化：

利用Design?Expert?8.0軟件根據多元二次回歸方程進行繪圖分析，得到回歸方程的響應面及其等高線圖。

2.如權利要求1所述的一種響應面法優化漿水的制備方法，其特征在于：所述混合菌是指短乳桿菌、植物乳桿菌、發酵乳桿菌、假腸膜明串珠菌按1g：1g：1g：1g的比例混合而得；所述短乳桿菌、植物乳桿菌、發酵乳桿菌、假腸膜明串珠菌均來自中國普通微生物菌種保藏管理中心。