[發明專利]一種定向突變的半乳糖基轉移酶的應用

有效

• 申請號: 201410027426.6
• 申請日: 2014-01-21
• 公開（公告）號: CN103849606A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 約瑟夫·弗戈邁爾;劉麗;陳歡
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;A23C9/12
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

1.定向突變的半乳糖基轉移酶1在生產不含乳糖或極低乳糖含量的天然奶中的應用，其中，所述的定向突變的半乳糖基轉移酶1是通過基因工程手段定向突變牛野生型β1,4-半乳糖基轉移酶1氨基酸序列第289位酪氨酸，或者豬野生型β1,4-半乳糖基轉移酶1氨基酸序列第288位酪氨酸，或者其他哺乳動物相似位點的酪氨酸，使野生型β1,4-半乳糖基轉移酶1的轉移半乳糖基到乙酰氨基葡萄糖或葡萄糖上變為突變型β1,4-半乳糖基轉移酶1的轉移乙酰氨基半乳糖到乙酰氨基葡萄糖或葡萄糖上。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的酪氨酸定向突變為亮氨酸。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于定向突變后的牛β1,4-半乳糖基轉移酶1氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于定向突變后的豬β1,4-半乳糖基轉移酶1氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

5.一種生產不含乳糖或極低乳糖含量的天然奶的方法，其特征在于對哺乳動物β1,4-半乳糖基轉移酶1氨基酸序列特定位點的酪氨酸進行突變，使野生型β1,4-半乳糖基轉移酶1的轉移半乳糖基到乙酰氨基葡萄糖或葡萄糖上變為突變型β1,4-半乳糖基轉移酶1的轉移乙酰氨基半乳糖到乙酰氨基葡萄糖或葡萄糖上，從而使乳汁中的乳糖(Galβ1,4Glc)發生改變成為乳糖類似物(GalNAcβ1,4Glc)。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述的哺乳動物選自豬、牛或羊。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于將牛野生型β1,4-半乳糖基轉移酶1氨基酸序列的第289位酪氨酸，或者豬野生型β1,4-半乳糖基轉移酶1氨基酸序列的第288位酪氨酸定向突變為亮氨酸。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于定向突變后的牛β1,4-半乳糖基轉移酶1氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

9.根據權利要求5所述的方法，其特征在于定向突變后的牛β1,4-半乳糖基轉移酶1氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。