[發明專利]一種4α-羥基-L-脯氨酸及其中痕量L-脯氨酸的檢測方法

有效

• 申請號: 201410026879.7
• 申請日: 2014-01-20
• 公開（公告）號: CN103940936A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 彭久合;吳丹;張鐵柱
• 申請（專利權）人: 天津市敬業精細化工有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 天津市新天方有限責任專利代理事務所 12104
• 代理人: 李桂英

1.一種4α-羥基-L-脯氨酸及其中痕量L-脯氨酸的檢測方法，其包括以下步驟：

（1）取4α-羥基-L-脯氨酸及L-脯氨酸對照品加水溶解，制得4α-羥基-L-脯氨酸及L-脯氨酸混合標準品溶液；

（2）取4α-羥基-L-脯氨酸樣品加水溶解，制得樣品溶液；

（3）將步驟1及步驟2所得混合標準品溶液及樣品溶液分別加入氯甲酸對硝基芐酯二氯甲烷溶液，混勻，靜止后分別取上層溶液稀釋，得衍生化后的4α-羥基-L-脯氨酸及L-脯氨酸混合標準品溶液和衍生化后的4α-羥基-L-脯氨酸樣品溶液；

（4）吸取步驟3獲得的衍生化后的4α-羥基-L-脯氨酸及L-脯氨酸混合標準品溶液和衍生化后的4α-羥基-L-脯氨酸樣品溶液注入液相色譜儀中，進行4α-羥基-L-脯氨酸測定，其中，色譜條件為：

流動相：0.1%磷酸水溶液:乙腈=1:1（v/v）；

色譜柱：Agilent?HC-C18,4.6×250mm,5μm；

流速：1.0mL/min；

進樣量：5μL；

檢測器：VWD；

（5）根據步驟4所得的色譜圖計算4α-羥基-L-脯氨酸樣品中4α-羥基-L-脯氨酸及L-脯氨酸含量。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟1具體為稱取2g4α-羥基-L-脯氨酸對照品及10mg?L-脯氨酸對照品置于25ml容量瓶中，加純化水溶解并稀釋至刻度，制得4α-羥基-L-脯氨酸及L-脯氨酸混合標準品溶液。

3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟2具體為稱取0.8g4α-羥基-L-脯氨酸樣品置于10ml容量瓶中，加純化水溶解并稀釋至刻度，制得4α-羥基-L-脯氨酸樣品溶液。

4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于：步驟3具體為取步驟1制得的4α-羥基-L-脯氨酸及L-脯氨酸混合標準品溶液及步驟2制得的4α-羥基-L-脯氨酸樣品溶液0.5ml，分別置于2個25ml容量瓶中，再分別加入0.5ml50%氯甲酸對硝基芐酯的二氯甲烷溶液，強力振蕩10min，再分別加入1ml1mol/L?NaOH振蕩1min，最后加純化水稀釋至刻度，靜止備用。