[發(fā)明專利]一種提取紫薇總DNA的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410025817.4
• 申請日: 2014-01-20
• 公開（公告）號: CN103834636A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張榮;孫廣宇;杜銀銀
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 西安弘理專利事務(wù)所 61214
• 代理人: 羅笛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提取紫薇總DNA的方法。

背景技術(shù)

紫薇（Lagerstroemia?indica）屬于千屈菜科（Lythraceae）紫薇屬（Lagerstroemia）。紫薇富含多糖、多酚以及次生代謝物質(zhì)，提取其DNA一直以來是個難題。現(xiàn)有很多關(guān)于提取多糖多酚植物DNA的方法，但是成功用于提取紫薇基因組DNA的方法未見報道。目前國內(nèi)外研究紫薇的專家學(xué)者在提取紫薇DNA時多選擇成品試劑盒（Cai,M.,Pan,H.T.,Wang,X.F.,He,D.,Wang,X.Y.,Wang,X.J.,Zhang,Q.X.,2011.Development?of?novel?microsatellites?in?Lagerstroemia?indica?and?DNA?fingerprinting?in?Chinese?Lagerstroemia?cultivars.Sci.Hortic.131,88–94.;Graham,S.A.,Hall,J.,Sytsma,K.Shi?S.H.,2005.Phylogenetic?analysis?of?the?Lythraceae?based?on?four?gene?regions?and?morphology.Int.J.Plant.Sci.166,995–1017.;Liu,Y.,He,D.,Cai,M.,Tang,W.,Li,X.Y.,Pang,H.T.,Zhang,Q.X.,2013.Development?of?microsatellite?markers?for?lagerstroemia?indica(Lythraceae)and?related?species.Applications?in?Plant?Sciences1,1-4.），對于普通的實(shí)驗室來說試劑盒提取DNA成本過高。多糖、多酚以及次生代謝物質(zhì)含量高的植物在DNA提取的過程中，多酚很容易被氧化，多糖抑制DNA聚合酶的活性，使得后續(xù)PCR擴(kuò)增以及分子生物學(xué)研究無法進(jìn)行（Horne,E.C.,Kumpatla,S.P.,Patterson,K.A.,Gupta,M.,Thompson,S.A.,2004.Improved?high-throughput?sunflower?and?cotton?total?DNA?extraction?and?PCR?fidelity.Plant?Mol.Biol.Rep.22,83a–83i.;Loomis,W.D.,1974.Overcoming?problems?of?phenolics?and?quinones?in?the?isolation?of?plant?enzymes?and?organelles.Method.Enzymol.31,528–544.;Porebski,S.,Bailey,L.G.,Baum,B.R.,1997.Modification?of?a?CTAB?DNA?extraction?protocol?for?plants?containing?high?polysaccharide?and?polyphenol?components.Plant?Mol.Biol.Rep.15,8–15.;Tel-zur,N.,Abbo,S.,Myslabodski,D.,Mizrahi,Y.,1999.Modified?CTAB?procedure?for?DNA?isolation?from?epiphytic?cacti?of?the?genera?Hylocereus?and?Selenicereus(Cactaceae).Plant?Mol.Biol.Rep.17,249–254.），目前還沒有簡單方便的提取紫薇總DNA的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種提取紫薇總DNA的方法，解決了紫薇總DNA提取困難的問題。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種提取紫薇總DNA的方法，將紫薇組織在低溫下剪碎，加入聚乙烯基吡咯烷酮粉末，在液氮中研磨后加入十六烷基三甲基溴化銨提取液水浴保溫，然后常溫下離心處理，取上清液加入等體積有機(jī)溶劑離心處理，將上清液進(jìn)行沉淀后經(jīng)離心、清洗、干燥等后處理得到紫薇總DNA。

具體包括以下步驟：

步驟1:

將紫薇組織從超低溫冰箱中取出，把組織剪碎并保持植物組織一直呈冰凍狀態(tài)，得到剪碎的植物組織；

步驟2：