[發(fā)明專利]一種提取紫薇總DNA的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410025817.4
• 申請(qǐng)日: 2014-01-20
• 公開（公告）號(hào): CN103834636A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張榮;孫廣宇;杜銀銀
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 西安弘理專利事務(wù)所 61214
• 代理人: 羅笛

1.一種提取紫薇總DNA的方法，其特征在于，將紫薇組織在低溫下剪碎，加入聚乙烯基吡咯烷酮粉末，在液氮中研磨后加入十六烷基三甲基溴化銨提取液水浴保溫，然后常溫下離心處理，取上清液加入等體積有機(jī)溶劑離心處理，將上清液進(jìn)行沉淀后經(jīng)離心、清洗、干燥等后處理得到紫薇總DNA。

2.如權(quán)利要求1所述的一種提取紫薇總DNA的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

步驟1:

將紫薇組織從超低溫冰箱中取出，把組織剪碎并保持植物組織一直呈冰凍狀態(tài)，得到剪碎的植物組織；

步驟2：

在所述步驟1剪碎的植物組織中直接加入PVP粉末，在液氮中研磨破碎紫薇植物組織，將研磨后的粉末轉(zhuǎn)移到無菌離心管中，加入預(yù)熱的CTAB提取液，使研磨后的粉末完全浸沒，水浴保溫一定時(shí)間，水浴保溫期間每隔10-15min搖動(dòng)一次離心管，使研磨后的粉末與提取液充分混勻，得到植物組織液；

步驟3：

將所述步驟2得到的植物組織液冷卻至室溫后以10000-12000r/min的轉(zhuǎn)速離心處理10min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一滅菌的離心管中，加入與上清液等體積的有機(jī)溶劑用手輕輕搖動(dòng)混勻，靜置5-10min后再以相同轉(zhuǎn)速離心處理10min；

步驟4：

將所述步驟3離心處理后得到的上清液再轉(zhuǎn)移至另一無菌離心管中，加入上清液1/10體積的3M的醋酸鈉和2/3體積的冰的異丙醇，于低溫下沉淀，得到沉淀液；

步驟5：

將所述步驟4所得沉淀液在一定溫度下離心處理，棄上清液，將沉淀物用體積濃度為70%的酒精洗三次，自然晾干，然后加入TE緩沖液，放置于4℃的溫度環(huán)境中使沉淀物充分溶解，得到紫薇總DNA。

3.如權(quán)利要求2所述的一種提取紫薇總DNA的方法，其特征在于，所述步驟1中超低溫冰箱溫度為-80℃。

4.如權(quán)利要求2所述的一種提取紫薇總DNA的方法，其特征在于，所述步驟2中加入的PVP粉末與植物組織的質(zhì)量比為1:1-10，所述PVP的相對(duì)分子質(zhì)量為45000-55000。

5.如權(quán)利要求2所述的一種提取紫薇總DNA的方法，其特征在于，所述步驟2中CTAB提取液的預(yù)熱的溫度為65℃，所述水浴溫度為65℃、保溫時(shí)間為30-120min。

6.如權(quán)利要求2所述的一種提取紫薇總DNA的方法，其特征在于，所述步驟2中CTAB提取液組成為：pH8.0的100mM?Tris-HCl，1.4mol/L?NaCl，4%CTAB，pH8.0的20mM?EDTA，和2%2-巰基乙醇，所述2-巰基乙醇使用前再加入。

7.如權(quán)利要求2所述的一種提取紫薇總DNA的方法，其特征在于，所述步驟3中有機(jī)溶劑由體積比為24:1的氯仿與異戊醇組成。

8.如權(quán)利要求2所述的一種提取紫薇總DNA的方法，其特征在于，所述步驟4中異丙醇溫度為-20℃，所述低溫為-20℃，沉淀時(shí)間不少于30min。

9.如權(quán)利要求2所述的一種提取紫薇總DNA的方法，其特征在于，所述步驟5中離心處理轉(zhuǎn)速為10000-12000r/min、時(shí)間為10min、溫度為4℃。

10.如權(quán)利要求2所述的一種提取紫薇總DNA的方法，其特征在于，所述步驟5中TE緩沖液組成為：pH8.0的10mM?Tris-HCl與pH8.0的1mMEDTA。