[發(fā)明專利]一種橙皮苷類免疫親和柱的制備及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410025361.1
• 申請(qǐng)日: 2014-01-21
• 公開（公告）號(hào): CN104784972B
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉麗娜;金紅宇;馬雙成;王瑩;王濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京華安麥科生物技術(shù)有限公司;中國(guó)食品藥品檢定研究院
• 主分類號(hào): B01D15/38
• 分類號(hào): B01D15/38;G01N1/34;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種橙皮苷類免疫親和柱在檢測(cè)橙皮苷和柚皮蕓香苷中的應(yīng)用，

所述橙皮苷類免疫親和柱包含有載體和橙皮苷類抗體；

所述的載體是瓊脂糖凝膠，所述的瓊脂糖凝膠包含但不限于溴化氰活化的瓊脂糖凝膠、交聯(lián)的瓊脂糖凝膠、聚丙烯酸瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠以及纖維素；

所述的橙皮苷類抗體包括單克隆IgG抗體或多克隆抗體；

所述橙皮苷類免疫親和柱制備方法為:

1)載體活化

取2％的預(yù)溶脹的瓊脂糖凝膠sepharose4B，用20倍體積的蒸餾水充分沖洗，洗去殘存的乙醇，用漏斗過濾掉水分，稱取濾去水分后的濕凝膠5克，加入7.5毫升0.8M的NaOH溶液，30％的環(huán)氧氯丙烷2毫升，2mg/ml的硼氫化鈉5毫升，在25℃下?lián)u床反應(yīng)8小時(shí)，反應(yīng)后，用大量的蒸餾水洗滌，去除凝膠中混雜的環(huán)氧氯丙烷；

2)橙皮苷類抗體與瓊脂糖凝膠載體連接

將抗體連接于瓊脂糖凝膠上，將橙皮苷類抗體溶于20mM pH7.4的PBS中，終濃度2mg/ml，將抗體加入用20mM pH7.4的PBS緩沖液洗滌過的凝膠中，室溫結(jié)合30分鐘，結(jié)合后的載體用PBS洗滌，連接有抗體的載體命名為抗體—sepharose；

3)載體交聯(lián)

將抗體—sepharose用0.1M pH9.0的硼酸緩沖液洗滌3次，然后加入0.1M pH9.0的硼酸緩沖液，在緩沖液中加入交聯(lián)劑庚二亞氨酸二甲酯至終濃度20mM，室溫交聯(lián)1小時(shí)，加入50mM pH9.0的乙醇胺終止反應(yīng)，并用50mM的乙醇胺封閉10分鐘，交聯(lián)后的抗體—sepharose載體用20mM pH7.4的PBS洗滌3次；

4)裝柱

將交聯(lián)后的抗體—sepharose載體根據(jù)需要裝入層析柱中，可根據(jù)需要制備不同容量的橙皮苷類免疫親和柱，放于4℃保存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，包含但不限于中藥中橙皮苷類成分的分離純化。