[發明專利]一種動物用肽疫苗及其制備

有效

• 申請號: 201410025274.6
• 申請日: 2009-06-04
• 公開（公告）號: CN103936841A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 肖進;齊鵬;栗利芳;李丙首;鄭應華
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/09
• 分類號: C07K14/09;A61K39/135;A61P31/14;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 李渤;張偉

技術領域

本發明涉及一組用于口蹄疫合成肽疫苗的多肽，以及含有這些多肽的疫苗及它們的制備方法，具體涉及一種用于口蹄疫合成肽疫苗的多肽，以及含有該多肽的疫苗及它們的制備方法。?

背景技術

口蹄疫(foot?and?mouth?disease，簡稱FMD)是一種發生于偶蹄動物的急性、高度接觸性、發熱性傳染病，在世界范圍內廣泛分布。由于其傳染性高，傳播迅速，感染豬、牛、羊等牲畜導致幼畜死亡，成年動物生產能力急劇下降，嚴重危害畜牧業的發展和肉食及其畜產品的生產和供應。同時會使動物及動物產品的市場流通和國際貿易受到極大的封鎖和限制，給流行國家和地區畜牧業生產造成巨大的經濟損失。口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的，口蹄疫病毒屬細小核糖核酸病毒，具有多型性、易變性等特點。目前，已知全世界有7種血清型的口蹄疫病毒：A、O、C、Sat1(南非I型)、Sat2(南非II型)、Sat3(南非III型)和Asia?I(亞洲I型)。而每種主型又分若干亞型，目前發現的亞型已有70多種。血清型A、O、C和Asia?I型最為常見，其中血清型A病毒的變種最多，具有超過30種亞型。研究結果表明：口蹄疫病毒的衣殼蛋白是由四種結構蛋白VP1、VP2、VP3和VP4(Logan?D等，1993)組成的，每種各60個。VP1-VP3組成衣殼蛋白亞單位，位于衣殼蛋白的外側，而VP4位于病毒顆粒的內部。VP1是主要的保護性抗原，現已發現O型口蹄疫有3個主要的抗原位點位于VP1上，其中133-160和200-213位構成了VP1上最重要且最容易變異的保護性抗原位點。?

當前在我國主要流行的口蹄疫是O型和Asia?I型口蹄疫。口蹄疫病毒各型之間的抗原性不同，彼此之間不能交互免疫。而且，在同一種血清型中抗原差異的程度也很大，以至于能夠有效地抵抗一種亞型的口蹄疫疫苗可能針對同一血清型中的另一種亞型沒有保護性。此外，口蹄疫毒株的抗原性還在不斷發生變化，隨著時間的推移，原有疫苗的效力減弱甚至消?失，因此給口蹄疫的防治工作帶來了很大的困難。?

目前，我國對口蹄疫實行強制性免疫，疫苗免疫是防治口蹄疫的主要手段。而我國現行使用的口蹄疫疫苗主要是病毒滅活疫苗，其存在著生物安全性差、副反應大、產品質量不穩定等問題。目前世界上很多國家已經停止使用滅活疫苗，也禁止從使用滅活疫苗的國家進口畜產品。在口蹄疫新型疫苗的研究方面，先后有基因工程亞單位疫苗、口蹄疫病毒載體疫苗、口蹄疫基因工程修飾疫苗的研究報道，但是其在免疫效果、生物安全性方面都存在著諸多問題，影響了這些新型疫苗的使用。此外，這些疫苗對于當前已經發生變異的流行毒株往往效果較差，不能有效地保護動物。?

發明內容

因此，本發明的目的在于提供一種用于口蹄疫合成肽疫苗的多肽，以及含有該多肽的疫苗，特別是用于口蹄疫合成肽疫苗的多肽，以及含有該多肽的疫苗。?

本發明的另一個目的是提供一種上述多肽以及上述疫苗的制備方法。?

為實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：?

一種用于口蹄疫合成肽疫苗的多肽，其中所述多肽具有SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示的氨基酸序列。?

上述氨基酸序列中的兩個半胱氨酸的巰基可以經氧化連接在一起形成二硫鍵。?

上述氨基酸序列的首尾氨基酸殘基之間可以反應形成共價連接。具體來說，上述氨基酸序列的首尾氨基酸殘基的羧基與氨基、或者羧基與羥基之間反應形成共價連接。?

一種口蹄疫合成肽疫苗，其中包括一種或多種上述多肽。例如：具有SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5和SEQ?ID?NO.6所示的氨基酸序列的多肽。上述疫苗還可以包含佐劑。?

本發明還提供了上述多肽的制備方法，其中包括以下步驟：?

(1)以氨基樹脂為起始原料，以9-芴甲氧羰基保護的氨基酸為單體，按照所述氨基酸序列依次縮合接上氨基酸，每步縮合反應后用乙酰咪唑封閉未反應的氨基端；?

(2)合成完畢后加入裂解試劑裂解多肽；?

(3)使用乙醚收集、沉淀多肽；?

(4)超濾純化多肽后進行無菌處理。?

在上述制備方法中，所述裂解試劑的組分體積比為三氟乙酸(TFA)∶三異丙基硅烷(TIS)∶苯酚∶H₂O＝85∶8∶6∶1；所述裂解時間為1-4小時。?