[發明專利]一種動物用肽疫苗及其制備

有效

• 申請號: 201410025274.6
• 申請日: 2009-06-04
• 公開（公告）號: CN103936841A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 肖進;齊鵬;栗利芳;李丙首;鄭應華
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: C07K14/09
• 分類號: C07K14/09;A61K39/135;A61P31/14;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產權代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 李渤;張偉

1.一種用于口蹄疫合成肽疫苗的多肽，其中所述多肽具有SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5或SEQ?ID?NO.6所示的氨基酸序列。

2.根據權利要求1所述的多肽，其特征在于，所述氨基酸序列中的兩個半胱氨酸的巰基經氧化連接在一起形成二硫鍵。

3.根據權利要求1或2所述的多肽，其特征在于，所述氨基酸序列的首尾氨基酸殘基之間反應形成共價連接。

4.根據權利要求3所述的多肽，其特征在于，所述氨基酸序列的首尾氨基酸殘基的羧基與氨基、或者羧基與羥基之間反應形成共價連接。

5.一種口蹄疫合成肽疫苗，其中包括一種或多種選自權利要求1至4中任一項所述的多肽。

6.根據權利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗包含佐劑。

7.一種根據權利要求1至4中任一項所述的多肽的制備方法，其中包括以下步驟：

(1)以氨基樹脂為起始原料，以9-芴甲氧羰基保護的氨基酸為單體，按照所述氨基酸序列依次縮合接上氨基酸，每步縮合反應后用乙酰咪唑封閉未反應的氨基端；

(2)合成完畢后加入裂解試劑裂解多肽；

(3)使用乙醚收集、沉淀多肽；

(4)超濾純化多肽后進行無菌處理。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述裂解試劑的組分體積比為三氟乙酸∶三異丙基硅烷∶苯酚∶H₂O＝85∶8∶6∶1。

9.根據權利要求7或8所述的制備方法，其特征在于，所述裂解時間為1-4小時。

10.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)包括以下步驟：

(a)脫保護反應：將氨基樹脂置于體積百分比為15-30％的六氫吡啶的N-甲基吡咯烷酮(NMP)溶液中，在20-28℃條件下反應25-40分鐘脫除氨基樹脂上的9-芴甲氧羰基保護基團；

(b)洗滌：氮氣吹干，N-甲基吡咯烷酮洗滌氨基樹脂；

(c)縮合反應：加入1-羥基苯丙三唑(HOBT)、二環己基碳二亞胺(DCC)與9-芴甲氧羰基保護的氨基酸在20-28℃條件下反應0.5-2.5小時；

(d)洗滌：氮氣吹干，N-甲基吡咯烷酮洗滌氨基樹脂；

(e)封閉反應：加入重量體積百分比為1.5-4％的乙酰咪唑的N-甲基吡咯烷酮(NMP)溶液，在20-28℃條件下反應20-40分鐘。

11.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)包括以下步驟：

(a)使用切向過濾膜包在20-28℃條件下超濾多肽抗原，除去小分子雜質；

(b)使用0.2微米在線濾器除菌保存。

12.一種根據權利要求5或6所述的疫苗的制備方法，其中包括以下步驟：

(1)用注射用水將一種或多種選自權利要求1至4中任一項所述的多肽稀釋到50μg/ml制得抗原水相；

(2)將佐劑經121℃、30分鐘滅菌備用；

(3)在20-28℃條件下，按照抗原水相與佐劑1∶1的體積比，先將佐劑加入乳化罐內，90-150轉/分鐘慢速攪拌1.5-3分鐘，緩慢加入水相，加完后攪拌20-30分鐘，再高速8000-10000轉/分鐘攪拌15-30分鐘，靜置5分鐘，分裝后即得。

13.根據權利要求1至4中任一項所述的多肽、權利要求5或6所述的疫苗在制備治療和/或預防口蹄疫的藥物中的用途。