[發(fā)明專利]一種動(dòng)物用肽疫苗及其制備

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410025274.6
• 申請日: 2009-06-04
• 公開（公告）號: CN103936841A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖進(jìn);齊鵬;栗利芳;李丙首;鄭應(yīng)華
• 申請（專利權(quán)）人: 中牧實(shí)業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07K14/09
• 分類號: C07K14/09;A61K39/135;A61P31/14;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京瑞恒信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11382
• 代理人: 李渤;張偉

1.一種用于口蹄疫合成肽疫苗的多肽，其中所述多肽具有SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5或SEQ?ID?NO.6所示的氨基酸序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于，所述氨基酸序列中的兩個(gè)半胱氨酸的巰基經(jīng)氧化連接在一起形成二硫鍵。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多肽，其特征在于，所述氨基酸序列的首尾氨基酸殘基之間反應(yīng)形成共價(jià)連接。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的多肽，其特征在于，所述氨基酸序列的首尾氨基酸殘基的羧基與氨基、或者羧基與羥基之間反應(yīng)形成共價(jià)連接。

5.一種口蹄疫合成肽疫苗，其中包括一種或多種選自權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的多肽。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗包含佐劑。

7.一種根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的多肽的制備方法，其中包括以下步驟：

(1)以氨基樹脂為起始原料，以9-芴甲氧羰基保護(hù)的氨基酸為單體，按照所述氨基酸序列依次縮合接上氨基酸，每步縮合反應(yīng)后用乙酰咪唑封閉未反應(yīng)的氨基端；

(2)合成完畢后加入裂解試劑裂解多肽；

(3)使用乙醚收集、沉淀多肽；

(4)超濾純化多肽后進(jìn)行無菌處理。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述裂解試劑的組分體積比為三氟乙酸∶三異丙基硅烷∶苯酚∶H₂O＝85∶8∶6∶1。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的制備方法，其特征在于，所述裂解時(shí)間為1-4小時(shí)。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)包括以下步驟：

(a)脫保護(hù)反應(yīng)：將氨基樹脂置于體積百分比為15-30％的六氫吡啶的N-甲基吡咯烷酮(NMP)溶液中，在20-28℃條件下反應(yīng)25-40分鐘脫除氨基樹脂上的9-芴甲氧羰基保護(hù)基團(tuán)；

(b)洗滌：氮?dú)獯蹈?，N-甲基吡咯烷酮洗滌氨基樹脂；

(c)縮合反應(yīng)：加入1-羥基苯丙三唑(HOBT)、二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)與9-芴甲氧羰基保護(hù)的氨基酸在20-28℃條件下反應(yīng)0.5-2.5小時(shí)；

(d)洗滌：氮?dú)獯蹈桑琋-甲基吡咯烷酮洗滌氨基樹脂；

(e)封閉反應(yīng)：加入重量體積百分比為1.5-4％的乙酰咪唑的N-甲基吡咯烷酮(NMP)溶液，在20-28℃條件下反應(yīng)20-40分鐘。

11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)包括以下步驟：

(a)使用切向過濾膜包在20-28℃條件下超濾多肽抗原，除去小分子雜質(zhì)；

(b)使用0.2微米在線濾器除菌保存。

12.一種根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的疫苗的制備方法，其中包括以下步驟：

(1)用注射用水將一種或多種選自權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的多肽稀釋到50μg/ml制得抗原水相；

(2)將佐劑經(jīng)121℃、30分鐘滅菌備用；

(3)在20-28℃條件下，按照抗原水相與佐劑1∶1的體積比，先將佐劑加入乳化罐內(nèi)，90-150轉(zhuǎn)/分鐘慢速攪拌1.5-3分鐘，緩慢加入水相，加完后攪拌20-30分鐘，再高速8000-10000轉(zhuǎn)/分鐘攪拌15-30分鐘，靜置5分鐘，分裝后即得。

13.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的多肽、權(quán)利要求5或6所述的疫苗在制備治療和/或預(yù)防口蹄疫的藥物中的用途。