[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)柑桔黃脈病毒的引物對(duì)及檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410025175.8
• 申請(qǐng)日: 2014-01-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103757135A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳洪明;李中安;王雪峰;周彥;唐科志;周常勇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑桔研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/70
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 上海光華專(zhuān)利事務(wù)所 31219
• 代理人: 余明偉

1.一種用于柑桔黃脈病毒檢測(cè)的引物對(duì)，其特征在于，所述引物對(duì)的序列為：

上游引物：5’-TACCGCAGCTATCCATTTCC-3’

下游引物：5’-GCAGAAATCCCGAACCACTA-3’。

2.一種用于柑桔黃脈病毒檢測(cè)的試劑盒，其特征在于：包括如權(quán)利要求1所述的引物對(duì)。

3.一種快速檢測(cè)柑桔黃脈病毒的RT-PCR的檢測(cè)方法，其特征在于包括如下步驟：提取柑桔樣品總核酸，設(shè)計(jì)特異性引物，對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，最后電泳鑒定：

所述RT-PCR擴(kuò)增所需試劑如下：

RNAiso?Plus1ml，氯仿200μL，異丙醇，75%乙醇，DEPC水，

2×Buffer液5μL，MgSO40.3μL，RT/Taq酶0.2μL，正反引物各0.2μL，滅菌去離子水2.1μL；

RT-PCR擴(kuò)增條件為：程序?yàn)?2℃，30min；94℃，2min;94℃，30S，55℃，30S，72℃，40S，40個(gè)循環(huán)；72℃，5min。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述提取樣品總核酸，樣品主要取春、秋梢嫩葉葉脈及附近組織。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的檢測(cè)方法，其特征在于：所述柑桔黃脈病毒的引物對(duì)如權(quán)利要求1所述。

6.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的檢測(cè)方法，其特征在于：電泳得到的特異性片段大小為612bp。

7.權(quán)利要求1所述的引物對(duì)在柑桔黃脈病毒檢測(cè)中的用途。

8.權(quán)利要求2所得試劑盒在柑桔黃脈病毒檢測(cè)中的用途。