[發(fā)明專利]一種猴腿蹄蓋蕨活性多酚的提取方法及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410024972.4
• 申請日: 2014-01-20
• 公開（公告）號: CN103784483A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發(fā)明（設計）人: 盛繼文
• 申請（專利權）人: 濰坊醫(yī)學院
• 主分類號: A61K36/11
• 分類號: A61K36/11;A61P39/06
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 朱廣存

技術領域

本發(fā)明涉及一種猴腿蹄蓋蕨活性多酚的提取方法及其用途，屬于天然藥物領域。

背景技術

隨著人口老齡化時代的來臨，衰老和老年性疾病已成為威脅人類健康的突出問題，人們對防治衰老、延年益壽有著迫切的要求，抗衰老藥物的開發(fā)和應用是解決這一問題的重要途徑。許多天然活性分子具有抗衰延壽作用，如番茄紅素、白藜蘆醇及茶多酚，已在醫(yī)藥、化妝品及食品等行業(yè)得到廣泛應用。天然抗衰老活性物質向人們展示了廣闊的應用前景。

猴腿蹄蓋蕨(Athyrium?multidentatum(Doll.)Ching)系蹄蓋藏科(Athyriaceae)植物，又名多齒蹄蓋藏、猴腿菜、猴腿兒，是一種多年生蕨類植物，其拳狀嫩葉和根狀莖可食用，味道鮮美，風味獨特，是長白山地區(qū)一種重要的山野菜。猴腿蹄蓋蕨不僅可以食用，也可藥用，是一類重要的“藥、食兩用”蕨類植物。《中華本草》記載猴腿蹄蓋蕨味微苦、性涼，去須根莖入藥，煎服，具有清熱解毒、殺蟲之功效，主治蟲積腹痛，同時可預防流感、麻疹。其營養(yǎng)成分和藥用功效與蕨菜相當。經(jīng)常食用可治療高血壓、頭暈、子宮出血、關節(jié)炎等癥。此外，猴腿蹄蓋蕨中含有豐富的賴氨酸，能促進骨骼發(fā)育和牙齒的形成，抑制病毒性感染等，對嬰幼兒、孕婦營養(yǎng)的補充有很大意義。

植物多酚是一類廣泛存在于植物體內的多元酚類化合物，具有抗衰老、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒等多種功效，被人們譽為人類健康的“第7營養(yǎng)素”。文獻檢索尚未發(fā)現(xiàn)猴腿蹄蓋蕨活性多酚的提取方法及應用的論文及專利報道。王曉林，鐘方麗，薛健飛探索了猴腿蹄蓋蕨總多酚的超聲提取工藝條件（猴腿蹄蓋蕨總多酚的超聲提取工藝研究[J].廣東農業(yè)科學2013,13：98-100,119），文獻中總多酚的提取采用65%乙醇在微沸狀態(tài)下超聲提取，多酚提取率為169.27mg/g，該方法提取的總多酚中含有大量雜質，多酚純度不高，同時加熱提取可能破壞活性多酚的結構。該文獻并未提到猴腿蹄蓋蕨活性多酚的化學組成和生物活性。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供了一種猴腿蹄蓋蕨活性多酚的制備方法。發(fā)明人采用溶劑冷浸，硅膠及Sephadex?LH-20柱色譜純化的方法制備猴腿蹄蓋蕨水溶性多酚。利用該方法制備的猴腿蹄蓋蕨活性多酚純度可達90%以上，質量穩(wěn)定可控。藥理學實驗表明本發(fā)明中制備的猴腿蹄蓋蕨活性多酚具有抗D-半乳糖致小鼠衰老作用。解決了現(xiàn)有猴腿蹄蓋蕨活性多酚提取過程中純度低、質量不可控、生物活性不明確等問題，填補了猴腿蹄蓋蕨活性多酚研究的空白。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案為：

文獻調查顯示，猴腿蹄蓋蕨根莖為主要用藥部位。預實驗結果顯示，猴腿蹄蓋蕨根莖多酚含量較高，本發(fā)明以猴腿蹄蓋蕨根莖為材料提取多酚。

一種猴腿蹄蓋蕨活性多酚的提取方法，包括以下步驟：

（1）猴腿蹄蓋蕨粗提物的制備：

A：甲醇提取：將猴腿蹄蓋蕨根莖粉碎，用甲醇室溫浸泡，過濾，合并濾液，濃縮，得甲醇提取物浸膏；

B：石油醚萃取：將得到的甲醇提取物浸膏用蒸餾水溶解，得到甲醇提取物浸膏溶液，然后用石油醚萃取，除去脂溶性成分，得到水溶液；

C：正丁醇萃取：將得到的水溶液用水飽和的正丁醇萃取，濃縮，得正丁醇萃取物浸膏；

（2）猴腿蹄蓋蕨活性多酚的純化：

D：硅膠柱分離：將得到的正丁醇萃取物浸膏取75g用甲醇溶解，上硅膠柱，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫，洗脫速度2～8mL/min；洗脫液依次為：石油醚/乙酸乙酯體積比為15～1:1的洗脫液20-30L、乙酸乙酯洗脫液10-15L、乙酸乙酯/甲醇體積比為15～6:1的洗脫液6-8L和乙酸乙酯/甲醇體積比為5:1的洗脫液6-8L，乙酸乙酯/甲醇體積比為1:1的洗脫液8-10L；收集乙酸乙酯洗脫液和乙酸乙酯/甲醇體積比為5:1的洗脫液，合并，減壓濃縮，得棕黑色浸膏；

E：Sephadex?LH-20柱色譜純化：棕黑色浸膏用甲醇溶解，Sephadex?LH-20柱色譜純化，CH₂Cl₂-甲醇梯度洗脫，洗脫速度2～8mL/min，洗脫液依次為：CH₂Cl₂洗脫液3-5L、CH₂Cl₂/甲醇體積比為15～1:1的洗脫液15-20L和甲醇洗脫液7-10L，收集甲醇洗脫液，濃縮，得猴腿蹄蓋蕨活性多酚。