[發明專利]一種注射用烏頭提取物的制備方法

無效

• 申請號: 201410024866.6
• 申請日: 2014-01-20
• 公開（公告）號: CN103768173A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 周彬彬;金郁;柯燕雄;傅青
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: A61K36/714
• 分類號: A61K36/714
• 代理公司: 上海三和萬國知識產權代理事務所(普通合伙) 31230
• 代理人: 朱小晶

【技術領域】

本發明屬于醫藥技術領域，可用于一種注射用烏頭提取物的制備方法。

【背景技術】

烏頭(Aconitum?carmichaeli?Dibx)屬于毛茛科烏頭屬植物，目前世界上已發現超過300個品類，我國是主要的產區之一。烏頭具有祛風除濕，勝濕止痛的功效，臨床上主要用于抗炎、鎮痛、鎮靜、解熱、免疫抑制、抗腫瘤作用及強心、降血壓、擴張血管等作用，具有較高的藥理活性和藥用價值。

烏頭注射劑是從烏頭中提取出的總生物堿制劑，臨床上主要用于癌癥晚期的鎮痛、抗炎和抗癌作用，給藥方式主要有肌肉注射和靜脈注射。傳統的肌肉注射通過皮下血管吸收，起效慢，而且很容易造成局部組織痙攣；此外，肌肉注射的劑量小，需多次給藥，給病人帶來痛苦的同時藥效也不顯著，為臨床應用帶來巨大的局限性，所以，烏頭注射劑正在向靜脈注射的方向發展。

烏頭的有效成分為二萜類生物堿，主要包括胺醇型生物堿，單酯型生物堿，雙酯型生物堿和脂肪族生物堿，其中雙酯型生物堿的含量最高，毒性也最大，在制備注射劑的過程中需要經過水解炮制，去除毒性。《中國藥典》對炮制后的烏頭中雙酯型生物堿的含量有明確的規定，不得超過0.04％，以保證用藥的安全性。

烏頭注射劑傳統的制備工藝比較簡單，采用乙醇冷浸提取，藥渣水煮，合并提取液后直接酸性條件下水煮炮制，活性炭脫色后再水煮的方法。此制備工藝沒有明確的除雜過程，得到的烏頭提取物中雜質含量較高，顏色較深；此外，該工藝在酸性條件下炮制效率不高，產物中還有部分毒性成分雙酯型生物堿殘留。因此，可以針對烏頭藥材建立一種烏頭提取物的制備工藝，該工藝有效地去除了色素等雜質，提高了藥效成分單酯型生物堿的含量，控制了毒性成分雙酯型生物堿的含量，再經過適當的藥效學和毒性評價，可作用烏頭注射劑的原料，目標是改善烏頭注射劑的安全性和穩定性。

【發明內容】

本發明的目的在于克服現有技術的不足，開發了一套完整的注射用烏頭提取物的制備方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一種注射用烏頭提取物的制備方法，其具體步驟為：

(1)超聲提取：將烏頭藥材粉碎后加入乙醇水溶液超聲提取兩次，合并兩次提取液，蒸至無醇味；

所述的乙醇水溶液的體積濃度為75～100％，用量為6～10倍量(w∶v)，w∶v是指烏頭藥材的質量和乙醇水溶液的體積比；

所述的提取時間為每次1～3小時；

(2)有機相萃取：直接向步驟(1)所得的提取液中加水補充至固體充分溶解，滴加氨水調堿性；加入有機溶劑萃取，合并有機相溶液蒸干；

所述的堿性條件為pH8～10，有機溶劑為乙酸乙酯，環己烷，二氯甲烷等弱極性溶劑；

所述的有機相與水相體積比為1∶1～1∶1.5，萃取2～4次；

(3)反相色譜純化：將步驟(2)所得的固體殘余物加入有機溶劑和水的混合溶液重溶，進行反相色譜純化；上樣量與填料的質量比為1∶30～1∶100；依次用洗脫液進行三次梯度洗脫，每次洗脫體積為2～4倍柱體積；取第二次洗脫液減壓濃縮，得到生物堿組分；

所述的有機溶劑可為甲醇、乙醇或者乙腈等；

所述的洗脫液有機相的體積分數為第一次10～20％，第二次20～60％，第三次100％；

所述的反相色譜填料粒徑為5～60μm；

(4)水解炮制：直接向步驟(3)所得的生物堿組分中加水，超聲至固體完全溶解，滴加氨水調堿性，回流煮沸，冷卻，冷凍干燥得到注射用烏頭提取物；

所述的水溶液用量為400～600倍量(w∶v)w∶v是指生物堿組分的質量和水溶液的體積比。

所述的水解炮制堿性條件為pH8～10；

所述的水解溫度為60～100℃恒溫環境，水解時間為20min～3h；

所述的注射用烏頭提取物采用外標法，測得單酯型生物堿含量以苯甲酰烏頭堿，苯甲酰中烏頭堿和苯甲酰次烏頭堿的總量計大于20％，雙酯型生物堿含量以烏頭堿，中烏頭堿和次烏頭堿的總量計小于4％。另有水解生成的胺醇型生物堿和中間產物焦烏頭堿。

淡黃色的烏頭提取物，采用外標法測得烏頭提取物中單酯型生物堿含量大于20％，雙酯型生物堿含量小于4％，換算到藥材中雙酯型生物堿含量小于0.005％，優于《中國藥典》中制川烏和制草烏項下毒性成分雙酯型生物堿的質量標準。

與現有技術相比，本發明的積極效果是：