[發(fā)明專利]一種巴馬小型豬精原干細(xì)胞誘導(dǎo)精子細(xì)胞的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410024686.8
• 申請(qǐng)日: 2014-03-31
• 公開（公告）號(hào): CN103820383A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙會(huì)敏;盧克煥;盧盛晟;陸陽(yáng)清;楊小淦;楊歡;李敏霞;張颯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/076
• 分類號(hào): C12N5/076
• 代理公司: 北京中譽(yù)威圣知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11279
• 代理人: 彭曉玲

1.一種巴馬小型豬精原干細(xì)胞誘導(dǎo)精子細(xì)胞的方法，包括配制培養(yǎng)基、制作STO飼養(yǎng)層、精原干細(xì)胞誘導(dǎo)精子細(xì)胞、精子細(xì)胞鑒定四個(gè)步驟，其特征在于：所述配制培養(yǎng)基包括配制STO培養(yǎng)液和精原干細(xì)胞培養(yǎng)液，STO培養(yǎng)液由基礎(chǔ)培養(yǎng)基DMEM/F12、FBS、β-巰基乙醇、丙酮酸鈉、青霉素、鏈霉素組成；精原干細(xì)胞培養(yǎng)液由基礎(chǔ)培養(yǎng)基DMEM/F12、BSA、丙酮酸鈉、B27添加物、GDNF、bFGF、GFRα1、β-巰基乙醇、青霉素、鏈霉素組成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的巴馬小型豬精原干細(xì)胞誘導(dǎo)精子細(xì)胞的方法，其特征在于：所述的STO培養(yǎng)液中FBS加入量為7%DMEM/F12體積，每毫升DMEM/F12加入0.1mmolβ-巰基乙醇、55ng丙酮酸鈉、100U青霉素、100μg鏈霉素。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的巴馬小型豬精原干細(xì)胞誘導(dǎo)精子細(xì)胞的方法，其特征在于：所述的精原干細(xì)胞培養(yǎng)液中BSA加入量為0.3%的DMEM/F12質(zhì)量，每毫升DMEM/F12加入55ng丙酮酸鈉、20μl?B27添加物、20ngGDNF、10ngbFGF、100ngGFRα1、0.1mmolβ-巰基乙醇、100U青霉素、100μg鏈霉素，所述的B27添加物為50倍濃度B27添加物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的巴馬小型豬精原干細(xì)胞誘導(dǎo)精子細(xì)胞的方法，其特征在于：精原干細(xì)胞在精原干細(xì)胞培養(yǎng)液中的培養(yǎng)條件為32.5℃、通入含有5%體積分?jǐn)?shù)CO₂的空氣條件下培養(yǎng)30天以上，每隔5-6天傳代一次，兩天換一次等量的培養(yǎng)液。