[發(fā)明專利]一種嗜熱堿性重組含錳過氧化氫酶及其表達(dá)載體和工程菌有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410023123.7 | 申請日： | 2014-01-17 |
| 公開（公告）號： | CN103725699A | 公開（公告）日： | 2014-04-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 趙志軍;史吉平;孫俊孫;何曉娟 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院上海高等研究院 |
| 主分類號： | C12N15/53 | 分類號： | C12N15/53;C12N9/08;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海光華專利事務(wù)所 31219 | 代理人： | 張艷 |
| 地址： | 201210 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 堿性 重組 過氧化氫酶 及其 表達(dá) 載體 工程 | ||
1.一種重組含錳過氧化氫酶的多核苷酸，其序列如SEQ?ID?No：1所示。
2.一種重組含錳過氧化氫酶，由權(quán)利要求1所述的多核苷酸序列編碼。
3.一種重組含錳過氧化氫酶表達(dá)載體，包含如權(quán)利要求1所述的重組含錳過氧化氫酶的多核苷酸序列。
4.如權(quán)利要求3所述的重組含錳過氧化氫酶表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體為pET系列表達(dá)載體。
5.如權(quán)利要求4所述的重組含錳過氧化氫酶表達(dá)載體，其特征在于，所述pET系列表達(dá)載體為pET28a(+)。
6.一種工程菌，所述工程菌由權(quán)利要求3-5任一權(quán)利要求所述的重組含錳過氧化氫酶表達(dá)載體轉(zhuǎn)化獲得。
7.如權(quán)利要求6所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌由權(quán)利要求3-5任一權(quán)利要求所述的重組含錳過氧化氫酶表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌獲得。
8.如權(quán)利要求7所述的工程菌，其特征在于，所述大腸桿菌為大腸桿菌BL21(DE3)。
9.一種重組含錳過氧化氫酶的制備方法，包括如下步驟：將權(quán)利要求6-8任一權(quán)利要求所述的工程菌在LB培養(yǎng)基中活化過夜后，轉(zhuǎn)接至TB培養(yǎng)基中，添加MnCl2和IPTG，再誘導(dǎo)培養(yǎng)。
10.一種工程菌，所述工程菌由權(quán)利要求3-5任一權(quán)利要求所述的重組含錳過氧化氫酶表達(dá)載體和錳離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Mnt?H表達(dá)載體轉(zhuǎn)化獲得。
11.如權(quán)利要求10所述的工程菌，其特征在于，所述錳離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Mnt?H表達(dá)載體采用pACYCDuet-1。
12.如權(quán)利要求10所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌由權(quán)利要求3-5任一權(quán)利要求所述的重組含錳過氧化氫酶表達(dá)載體和錳離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Mnt?H表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌獲得。
13.如權(quán)利要求12所述的工程菌，其特征在于，所述大腸桿菌為大腸桿菌BL21(DE3)。
14.一種重組含錳過氧化氫酶的制備方法，包括如下步驟：將權(quán)利要求10-13任一權(quán)利要求所述的工程菌在LB培養(yǎng)基中活化過夜后，轉(zhuǎn)接至含有Kan和Cm的TB培養(yǎng)基中，添加IPTG，同時(shí)添加MnCl2，再誘導(dǎo)培養(yǎng)。
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