[發(fā)明專利]人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410022611.6
• 申請日: 2014-01-17
• 公開（公告）號: CN103736089A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 侯文禮;蔡勇;張濤
• 申請（專利權(quán)）人: 成都康華生物制品有限公司
• 主分類號: A61K39/205
• 分類號: A61K39/205;A61K47/42;A61K9/19;A61P31/14;F26B5/06
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 王學(xué)強;魏曉波

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種狂犬病疫苗及其制備方法，具體涉及一種人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗及其制備方法。

背景技術(shù)

狂犬病疫苗是由狂犬病病毒在宿主細胞上擴增培養(yǎng)，然后經(jīng)滅活、純化、凍干等步驟后得到的用于預(yù)防或治療對狂犬病毒有高危接觸者或已感染狂犬病毒者的疫苗。目前作為制備狂犬病疫苗的宿主細胞可以是最早開始使用的動物細胞如Vero細胞，還可以是人二倍體細胞，前述兩種宿主細胞中，人二倍體細胞來源于人體組織，是目前已經(jīng)公知的可用于制備狂犬病疫苗的宿主細胞；人二倍體細胞目前經(jīng)過數(shù)十年的研究，其生長特性，遺傳穩(wěn)定性、外源因子污染檢查、致腫瘤陰性等特征已被充分驗證，另外，人二倍體細胞來源于人體組織，其用于制備疫苗時其內(nèi)的殘余成分不會成為超敏反應(yīng)原，因此，其所制得的疫苗的安全性較高。

利用人二倍體細胞作為宿主細胞擴增培養(yǎng)而獲得的狂犬病毒原液需要經(jīng)過滅活、純化、凍干等工藝步驟后才可作為用于人體的狂犬病疫苗成品。前述步驟中，無論是滅活、純化，或者是凍干工藝均會對最后所獲得的狂犬病疫苗的性質(zhì)有一定的影響。

擴增培養(yǎng)后的狂犬病毒原液經(jīng)滅活和純化后得到的狂犬病毒半成品在凍干過程中，由于凍干方法、凍干工藝參數(shù)的區(qū)別常常導(dǎo)致所獲得狂犬病疫苗在物理形態(tài)、殘余水分含量、溶解性等性能上具有差異，從而導(dǎo)致了狂犬病疫苗的效價穩(wěn)定性有差異。

另外，狂犬病毒半成品在凍干過程中，為了避免效價穩(wěn)定性的降低，一般均為采用在狂犬病毒半成品中加入一定比例的穩(wěn)定劑，如人血白蛋白；目前在狂犬病毒半成品每mL中所加入的人血白蛋白的量一般為1g或3g，或者是采用更多的加入量，如10g；由于人血白蛋白成本價格較高，加入過多則產(chǎn)品成本偏高，若加入過少則產(chǎn)品的效價穩(wěn)定性則較差。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供一種人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，其熱穩(wěn)定性和效價穩(wěn)定性相對于用現(xiàn)有的凍干工藝制備出的人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗而言具有明顯的提高。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是采用一種人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗在物理形態(tài)上具有質(zhì)量分數(shù)為92.0%以上的疏松體，并且所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病毒疫苗的溶解時間為95s-99s。

優(yōu)選的，所述疏松體為乳白色。

優(yōu)選的，所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗包括有將人二倍體細胞作為宿主細胞接種狂犬病毒后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品經(jīng)凍干獲得所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下：

凍干步驟中包括有升溫階段、預(yù)凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥所設(shè)置的溫度梯度為從-40.0℃到-35.0℃，溫度間隔為1℃和/或0.5℃；所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為200-260min。

優(yōu)選的，所述凍干步驟如下：

凍干步驟中包括有升溫階段、預(yù)凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設(shè)置為-40.0℃、-39.0℃、-38.5℃、-38.0℃、-37.5℃、-37.0℃、-36.5℃、-36.0℃、-35.0℃；所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其詳細說明如下：

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗在物理形態(tài)上具有質(zhì)量分數(shù)為92.0%以上的疏松體，并且所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗的溶解時間為95s-99s。

本發(fā)明所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗為了解決現(xiàn)有的利用同樣的宿主細胞培養(yǎng)出的狂犬病疫苗在效價穩(wěn)定性上的不足之處，主要采用了將狂犬病疫苗產(chǎn)品的物理形態(tài)進行調(diào)整，將狂犬病疫苗產(chǎn)品在物理形態(tài)上所具有疏松體的含量進行提高，當(dāng)其含量達到92.0%以上，同時所得疫苗產(chǎn)品的溶解時間為95s-99s時，其所得到的狂犬病疫苗的效價穩(wěn)定性可以得到明顯的提高；下文中分別通過熱穩(wěn)定性試驗和效價穩(wěn)定性試驗來說明，具體可詳見實施例部分。

本發(fā)明所述人二倍體細胞可以是現(xiàn)有常用的任一種人二倍體細胞株系，包括有WI-38、KMB17、IMR-90、MRC-5、2BS等。

進一步的，本發(fā)明所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗可優(yōu)選為以下制備方法所得：包括有將人二倍體細胞作為宿主細胞接種狂犬病毒后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品經(jīng)凍干獲得所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下：