[發明專利]梯度溶氧發酵提高釀酒酵母超氧化物歧化酶產量的方法

無效

• 申請號: 201410022299.0
• 申請日: 2014-01-17
• 公開（公告）號: CN103773742A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 王克文;孫愛君;郗宏波;黃福山;朱學金;張桂遠;胡森
• 申請（專利權）人: 中興能源（天津）有限公司
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12R1/865
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

1.梯度溶氧發酵提高釀酒酵母超氧化物歧化酶產量的方法，其特征包括如下步驟：

1）菌種活化糖液準備：將濃度為15-25g/L葡萄糖水溶液，高壓滅菌15-25min，冷卻至室溫；

2）發酵基礎培養基和補料液準備，其中：發酵基礎培養基：葡萄糖20-50g/L，蛋白胨5-15g/L，酵母膏10-20g/L，KH₂PO₄0.3-1.0g/L，CuSO₄·5H₂O0.3-1.0g/L，ZnSO₄·7H₂O0.3-1.0g/L，MgSO₄·7H₂O2-10g/L，余量為水，自然pH，121℃滅菌20-25min；補料液是20-50g/L葡萄糖水溶液；

3）菌種復水與活化：釀酒高活性干酵母按質量1%接種于所述菌種活化糖液中，置于搖床，于30-34℃，150-200rpm，復水與活化1-2小時；

4）發酵培養和溶氧定向誘導：將復水與活化后的菌液按體積30%-60%接種于發酵基礎培養基，在轉速300-700rpm，30-32℃起始發酵，在發酵3小時，開始流加補料液，補料與溶氧量聯動，在發酵3-40小時，控制溶氧量在10%以下，補料液流加速度相當于每升發酵基礎培養基每分鐘補葡萄糖0.1-0.2g；在發酵40.01-45小時，控制溶氧量在10%-25%，補料液流加速度相當于每升發酵基礎培養基每分鐘補葡萄糖0.05-0.1g；在發酵45.01-55小時，控制溶氧量在25%-35%，補料液流加速度相當于每升發酵基礎培養基每分鐘補葡萄糖0.02-0.04g；發酵55.01-65小時，控制溶氧量35%-45%，補料液流加速度相當于每升發酵基礎培養基每分鐘補葡萄糖0.004-0.02g；65.01-70小時，控制溶氧量在50%以上；

5）超氧化物歧化酶粗酶液提取：

將步驟4）獲得的發酵液以7000-10000rpm室溫離心10-20分鐘，收集細胞；按細胞與水之比為1g:3-5ml的比例，將細胞重懸于水中，超聲破壁；將破壁液在7000-10000rpm室溫離心10-20分鐘，收集上清，得到超氧化物歧化酶粗提液。