[發明專利]一種奶牛酮病診斷試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 201410020569.4
• 申請日: 2014-01-13
• 公開（公告）號: CN103792230A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 張志剛;姜惠潔;王明河;張偉倩;姜婧;陳雁;楊大千;于洪祥;趙樹臣;王洪斌
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種奶牛酮病診斷試劑盒，包括檢測器、3種試劑和標準比色板，其特征在于：檢測器上開有多個加樣孔，檢測器的一端設置有凹槽，檢測器的另外一端為手持端，試劑1為心肌黃酶、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸和β-羥丁酸脫氫酶的混合液，按質量比為2∶2∶1混合；試劑2為二甲基亞砜、磷酸氫二鈉、氯化鎂、疊氮鈉和亞硝酸鈉的混合溶液，二甲基亞砜質量濃度為0.1％，疊氮鈉的質量濃度為0.01％、亞硝酸鈉的質量濃度為0.01％，磷酸氫二鈉的質量濃度為1％，氯化鎂的質量濃度為1％；試劑3為噻唑藍溶液，質量濃度為0.2％。

2.根據權利要求1所述的一種奶牛酮病診斷試劑盒，其特征在于：所述的標準比色板為1個白色區間和3個紫色區間，其中3個紫色區間隨酮濃度增加，從左至右顏色逐漸加深；4個顏色區間分別對應的結果為正常，弱陽，中陽和強陽。

3.根據權利要求1或2所述的一種奶牛酮病診斷試劑盒，其特征在于：采用奶牛乳汁檢測。

4.一種以非診斷為目的檢測奶牛酮病的檢測方法，其特征在于：

步驟一、乳汁酮體分離的方法為：將新鮮采集的奶牛乳汁收集于離心管中，按體積比3∶1∶1∶1，加入質量濃度為50％高氯酸、質量濃度為37％鹽酸、質量濃度為98％硫酸和質量濃度為65％硝酸，16500r／min離心15-20min，收集上清液待測；

步驟二、取200mg試劑1，加入到20mL試劑2中混合均勻，將試劑1和試劑2的混合液加入到檢測器的加樣孔中，每孔加入50μL，再加入20μL試劑3，充分混勻，最后加入50μL乳汁上清液樣品；所述的試劑1為心肌黃酶、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸和β-羥丁酸脫氫酶的混合物，按質量比為2∶2∶1混合；試劑2為二甲基亞砜、磷酸氫二鈉、氯化鎂、疊氮鈉和亞硝酸鈉的混合溶液，二甲基亞砜質量濃度為0.1％，疊氮鈉的質量濃度為0.01％、亞硝酸鈉的質量濃度為0.01％，磷酸氫二鈉的質量濃度為1％，氯化鎂的質量濃度為1％；試劑3為噻唑藍溶液，質量濃度為0.2％；

步驟三、加樣3分鐘后觀察顏色反應，與標準比色板所提供的標準色階相對照，判讀檢測結果；所述的標準比色板從左至右為1個白色區間和3個紫色區間，其中3個紫色區從左至右顏色逐漸加深，體現從左至右酮濃度逐漸增加。

5.根據權利要求4所述的一種以非診斷為目的檢測奶牛酮病的檢測方法，其特征在于，步驟二或采取如下方法：

取200mg試劑1，加入到20mL體積比為5∶2的試劑2和試劑3的混合液中，充分混勻，將混合液加入到檢測器的加樣孔中，每孔加入50μL，然后再加入50μL乳汁上清液樣品。