[發(fā)明專(zhuān)利]一種奶牛酮病診斷試劑盒及其檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410020569.4
• 申請(qǐng)日: 2014-01-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103792230A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張志剛;姜惠潔;王明河;張偉倩;姜婧;陳雁;楊大千;于洪祥;趙樹(shù)臣;王洪斌
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/78
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/78
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種奶牛酮病診斷試劑盒，包括檢測(cè)器、3種試劑和標(biāo)準(zhǔn)比色板，其特征在于：檢測(cè)器上開(kāi)有多個(gè)加樣孔，檢測(cè)器的一端設(shè)置有凹槽，檢測(cè)器的另外一端為手持端，試劑1為心肌黃酶、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸和β-羥丁酸脫氫酶的混合液，按質(zhì)量比為2∶2∶1混合；試劑2為二甲基亞砜、磷酸氫二鈉、氯化鎂、疊氮鈉和亞硝酸鈉的混合溶液，二甲基亞砜質(zhì)量濃度為0.1％，疊氮鈉的質(zhì)量濃度為0.01％、亞硝酸鈉的質(zhì)量濃度為0.01％，磷酸氫二鈉的質(zhì)量濃度為1％，氯化鎂的質(zhì)量濃度為1％；試劑3為噻唑藍(lán)溶液，質(zhì)量濃度為0.2％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種奶牛酮病診斷試劑盒，其特征在于：所述的標(biāo)準(zhǔn)比色板為1個(gè)白色區(qū)間和3個(gè)紫色區(qū)間，其中3個(gè)紫色區(qū)間隨酮濃度增加，從左至右顏色逐漸加深；4個(gè)顏色區(qū)間分別對(duì)應(yīng)的結(jié)果為正常，弱陽(yáng)，中陽(yáng)和強(qiáng)陽(yáng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種奶牛酮病診斷試劑盒，其特征在于：采用奶牛乳汁檢測(cè)。

4.一種以非診斷為目的檢測(cè)奶牛酮病的檢測(cè)方法，其特征在于：

步驟一、乳汁酮體分離的方法為：將新鮮采集的奶牛乳汁收集于離心管中，按體積比3∶1∶1∶1，加入質(zhì)量濃度為50％高氯酸、質(zhì)量濃度為37％鹽酸、質(zhì)量濃度為98％硫酸和質(zhì)量濃度為65％硝酸，16500r／min離心15-20min，收集上清液待測(cè)；

步驟二、取200mg試劑1，加入到20mL試劑2中混合均勻，將試劑1和試劑2的混合液加入到檢測(cè)器的加樣孔中，每孔加入50μL，再加入20μL試劑3，充分混勻，最后加入50μL乳汁上清液樣品；所述的試劑1為心肌黃酶、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸和β-羥丁酸脫氫酶的混合物，按質(zhì)量比為2∶2∶1混合；試劑2為二甲基亞砜、磷酸氫二鈉、氯化鎂、疊氮鈉和亞硝酸鈉的混合溶液，二甲基亞砜質(zhì)量濃度為0.1％，疊氮鈉的質(zhì)量濃度為0.01％、亞硝酸鈉的質(zhì)量濃度為0.01％，磷酸氫二鈉的質(zhì)量濃度為1％，氯化鎂的質(zhì)量濃度為1％；試劑3為噻唑藍(lán)溶液，質(zhì)量濃度為0.2％；

步驟三、加樣3分鐘后觀察顏色反應(yīng)，與標(biāo)準(zhǔn)比色板所提供的標(biāo)準(zhǔn)色階相對(duì)照，判讀檢測(cè)結(jié)果；所述的標(biāo)準(zhǔn)比色板從左至右為1個(gè)白色區(qū)間和3個(gè)紫色區(qū)間，其中3個(gè)紫色區(qū)從左至右顏色逐漸加深，體現(xiàn)從左至右酮濃度逐漸增加。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種以非診斷為目的檢測(cè)奶牛酮病的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟二或采取如下方法：

取200mg試劑1，加入到20mL體積比為5∶2的試劑2和試劑3的混合液中，充分混勻，將混合液加入到檢測(cè)器的加樣孔中，每孔加入50μL，然后再加入50μL乳汁上清液樣品。