[發(fā)明專利]靶向重組蛋白光敏劑及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410018463.0 | 申請日： | 2014-01-16 |
| 公開（公告）號： | CN103768599A | 公開（公告）日： | 2014-05-07 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王永剛;張偉杰;馬建忠;冷非凡;蒲秀瑛;陳卓;張庭瑞 | 申請（專利權(quán)）人： | 蘭州理工大學(xué) |
| 主分類號： | A61K41/00 | 分類號： | A61K41/00;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61P35/00 |
| 代理公司： | 蘭州振華專利代理有限責(zé)任公司 62102 | 代理人： | 董斌 |
| 地址： | 730050 *** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 靶向 重組 蛋白 光敏劑 及其 制備 方法 | ||
1.靶向重組蛋白光敏劑，該光敏劑是通過將6×His蛋白純化標簽、EGFR干擾序列、linker蛋白、集孢藻PCC7120別藻藍蛋白α進行融合，構(gòu)建融合蛋白光敏劑，經(jīng)過發(fā)酵和純化后，去除6×His標簽，獲得可以靶向EGFR的重組蛋白光敏劑，經(jīng)650nm光照后可以殺滅腫瘤細胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向重組蛋白光敏劑，其特征在于融合蛋白EGFR干擾序列選自人EGFR序列，別藻藍蛋白α亞基序列選自集孢藻PCC7120別藻藍蛋白α亞基序列，并和linker和6×His蛋白純化標簽序列融合而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向重組蛋白光敏劑，其特征在于融合蛋白具有序列2的氨基酸序列。
4.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向重組蛋白光敏劑，其特征在于編碼融合蛋白的基因，該基因具有序列1的核苷酸序列。
5.靶向重組蛋白光敏劑的制備方法，其步驟為：
（1）設(shè)計引物EGFRi1和EGFRi2，即序列3和序列4，linker1和linker2，即序列5和序列6，以及APCα1和APCα2，即序列7和序列8；
（2）從培養(yǎng)的集孢藻PCC7120中提取總DNA，利用PCR的方法克隆別藻藍蛋白α亞基基因APCα；
（3）以EGFRi1和EGFRi2為引物進行重疊延伸PCR擴增，得到EGFRi－linker1核苷酸序列；
（4）以linker1和linker2為引物進行重疊延伸PCR擴增，得到linker2－APCα1核苷酸序列；
（5）以EGFRi－linker1和linker2－APCα1為模版，以EGFRi1和linker2為引物進行PCR擴增，得到EGFRi－linker－APCα1核苷酸序列；
（6）以EGFRi－linker－APCα1和APCα為模版，以EGFRi1和APCα2為引物得到完整的融合蛋白基因序列，融合序列全長597bP；
（7）將融合基因序列克隆入表達載體pCDF-cpcE-cpcF,?ho1-pcyA?載體，轉(zhuǎn)化E.?coli?BL21；
（8）培養(yǎng)重組菌種8h，誘導(dǎo)表達12h，超聲破碎菌體，用鎳親和色譜柱純化蛋白，用TAGZyme去除6×His標簽，得到純化的重組蛋白光敏劑。
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