[發明專利]雞飼料外源碳水化合物酶譜的篩選方法

有效

• 申請號: 201410018289.X
• 申請日: 2014-01-15
• 公開（公告）號: CN103882094B
• 公開（公告）日: 2016-11-30
• 發明（設計）人: 陳亮;張宏福;侯小峰;付生慧;何科林
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34
• 代理公司: 北京科迪生專利代理有限責任公司 11251
• 代理人: 盧紀;顧煒

技術領域

本發明涉及雞飼料外源碳水化合物酶譜的篩選方法，特別是涉及利用體外模擬消化法快速優化雞飼料外源碳水化合物酶譜的方法。

背景技術

碳水化合物是飼料的主體部分，也是動物的主要能量來源。隨著飼料成本持續上漲，人們不斷尋求較低廉的飼料原料（如：玉米加工副產物）部分替代傳統的玉米和豆粕飼料原料。然而，這些加工副產物常含有較高的日糧纖維，而這些日糧纖維不能被動物機體充分利用（Anguita?et?al.,2006）。目前，通常采用添加外源碳水化合物酶來提高日糧纖維的利用率，碳水化合物酶常以非淀粉多糖酶為主，如木聚糖酶（Engberg?et?al.,2006；丁雪梅等,2009；Selle?et?al.,2003）、纖維素酶（Nahm?et?al.,1985；陳曉春等,2005）、β-葡聚糖酶（Philip?et?al.,1995；Yu?et?al.,1998）等，而碳水化合物酶的作用效果與日糧組成、酶的活性、酶譜配伍密切相關。然而，外源碳水化合物酶的類型和配伍等不確定因素，導致目前普遍對外源酶的添加具有一定的盲目性。

篩選飼料的最優酶譜的方法主要有體內法（in?vivo）和體外法（in?vitro）。體內法就是進行動物試驗，常常耗資、費力、費時，系統誤差和偶然誤差影響因素多（陳亮等,2013）。而體外法具有快速、簡便、費用低等優點，但目前體外法選擇的參數和條件常常缺乏理論的解釋，具有一定的隨意性（Coles?et?al.,2005）。因此，選取合理的體外模擬消化參數，模擬雞飼料的消化過程，針對不同雞飼料外源碳水化合物成分特性，篩選與之相適應的碳水化合物酶譜，對于充分發揮飼料潛能，提高飼料利用率和增加養殖生產效益具有重要意義。

發明內容

本發明的技術解決問題：為了克服目前雞飼料中添加外源酶的盲目性，提供一種雞飼料外源碳水化合物酶譜的快速篩選方法，通過體外法模擬動物消化過程，使用雞飼料體外能值表征碳水化合物酶的作用效果，快速獲取雞飼料最優的外源碳水化合物酶譜。

本發明的技術解決方案如下：雞飼料外源碳水化合物酶譜的篩選法，包括步驟如下：

（1）選取目標的雞飼料，并在所述雞飼料中添加多種已知類型的外源碳水化合物酶，每種外源碳水化合物酶的添加劑量設置系列的濃度梯度；

（2）將已知重量的加酶雞飼料樣品置于三角瓶中，并加入已知配比的模擬胃消化的緩沖液和消化酶液，混合均勻，其中飼料、緩沖液和消化酶液的重量百分比范圍是2：6：1～2：10：1，并在設定的模擬胃消化參數下將雞飼料樣品進行模擬胃的消化過程；

（3）待模擬胃消化結束后，在三角瓶中加入已知配比的模擬小腸消化的緩沖液和消化酶液，其中緩沖液和消化酶液的重量百分比范圍是19：1～21：1，并繼續在設定的模擬小腸消化參數下將雞飼料樣品進行模擬小腸的消化過程；

（4）待模擬小腸消化結束后，將消化殘渣烘干至恒重，測定殘渣體外消化能值，計算出添加每種碳水化合物酶的雞飼料體外消化能值，并根據碳水化合物酶和體外消化能值的回歸關系，得出每種碳水化合物酶能提高目標的雞飼料體外消化能值的臨界點；

（5）將每種碳水化合物酶依據所述臨界點進行編碼，采用回歸正交旋轉組合設計，以體外消化能值為特征指標，篩選外源碳水化合物酶的最優酶譜。

所述步驟（1）中目標的雞飼料中添加3～7種外源碳水化合物酶，添加劑量設置0～1000μg/g系列濃度梯度。

所述步驟（2）中模擬胃消化的緩沖液為：pH為2.0，摩爾質量比90：8～100：11=氯化鈉：氯化鉀的混合緩沖溶液；模擬胃消化的酶液為：pH2.0的900～1500U/mL胃蛋白酶液。

所述步驟（2）中模擬胃消化參數為：溫度40～42℃，搖床轉速120～180rpm，消化時間4～6h。

所述步驟（3）中模擬小腸消化的緩沖液為：pH為6.3～6.6，摩爾質量比90：18：152～98：22：186=氯化鈉：氯化鉀：磷酸鹽的混合緩沖溶液；模擬小腸消化的酶液為：pH6.3～6.6，單位酶活力比37：8：386：1～46：12：464：2=胰蛋白酶：糜蛋白酶：淀粉酶：脂肪酶的混合酶液。

所述步驟（3）中模擬小腸消化的參數為：溫度40～42℃，搖床轉速120～180rpm，消化時間15～18h。