[發明專利]鹿角炭角菌的簡易快速分離純化培養方法

有效

• 申請號: 201410016608.3
• 申請日: 2014-01-15
• 公開（公告）號: CN103725619A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 李宗菊;趙昱;張曦予;唐萍;程霞;馮遼遼;左奎;曹玉
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種鹿角炭角菌的簡易快速分離純化培養方法，屬于生物技術領域，具體地說是屬于特殊真菌室內培養范疇。

背景技術

鹿角炭角菌[Xylaria?hypoxylon?(L.)?Grev.]屬于糞殼菌綱(Sordariomycetes)、?炭角菌亞綱(Xylariomycetidae)、子囊菌亞門(Ascomycotina)、炭角菌目(Xylariales)、炭角菌科(Xylariaceae)、炭角菌屬(Xylaria)。其子座小或中型，高4.5～10.5cm，粗3～6mm，頂部漸細，分枝較多，呈鹿角狀，基部柱形，有細絨毛，污白色、乳白色，后期呈黑色；子囊殼黑色，子囊130～170μm×8～10μm，子囊孢子8個，光滑，無隔，13～17μm×6～8μm。鹿角炭角菌為大陸記錄新種，資料報道不多，涉及生物學特性等的研究極少。

炭角菌屬的真菌，是生長于白蟻廢巢上的一類重要寄生性指示菌，具有較高的藥用價值，如長柄炭角菌（Xylaria?longipes?Nitschke）發酵液中已分離到具有很強抗真菌活性的xylaramide化合物、抗氧化活性的tyrosol和2，5-二羥基呋喃。劉慶洪等研究得出，1mg/mL的鹿角炭角菌多糖復合物對HIV逆轉錄酶活性的抑制率為80.4±1.2%，鹿角炭角菌代謝產物具有免疫調節活性。目前研究較多的是黑柄炭角菌[Xylaria?nigripes(Kl.)Sacc.]，其具有以下功能：①鎮靜安眠、增加腦內能量儲存，可適用于神經官能癥、植物性神經紊亂、多種焦慮抑郁狀態、神經性頭痛、偏頭痛等；②菌絲粗多糖可改善免疫系統的功能，明顯提高機體的免疫能力；③具有抗前列腺增生作用，能治療前列腺增生并改善癥狀；④能提高貧血動物的造血功能等。

炭角菌屬真菌價值大，但由于生境特殊，資源非常稀少，一般要等白蟻死后，在廢棄的白蟻巢穴上才會長出，生長周期一般5～8天，時間短，要遇到或采集到合適的子實體很難，這也給菌種分離及純培養帶來了一定的難度，因此目前炭角菌屬的純培養物種極少，另外極其有限的資源也使其深度研究、開發利用難以進行。

本發明在雞樅菌的人工培養研究過程中偶然發現，直接利用活蟻巢培養炭角菌是一種很好很簡單很快速的培養方法。利用這種方法，可以在短時間內培養出大量的炭角菌子實體，但因子實體周期短，一個蟻巢上長出的子實體有限，有必要進行純培養研究。利用本發明產生的子實體干凈、健壯，很容易得到純培養菌絲。這為今后炭角菌的較大規模人工培養、可持續性的研究及開發利用等提供了較好的思路及方法。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種簡易、快速、成功率高的炭角菌分離純化方法。

本發明的技術任務是，室內土埋活蟻巢，以快速大量生長炭角菌，利用炭角菌子實體，進行分離純化培養；

所述室內土埋活蟻巢的方法及步驟為：在野外有雞樅菌生長的地方，挖取活蟻巢，將長有大量白蟻的較完整蟻巢裝于黑色塑料袋中，帶回室內，放置于黑暗條件下；準備長、寬、高為40*20*25cm的長方體玻璃魚缸，先在缸中加入3～5cm從野外帶回的巢土；待第5～7天，塑料袋中白蟻大量死亡，還活有1/6～1/4，巢上長出大量灰白色菌絲時，將其輕置于缸中，上面再覆6～8cm巢土，噴水至土表濕透；2～4天后，土表即長出很多白色、細棒狀、少分枝的炭角菌，第6～8天，分枝增多，基部增粗、增高，炭角菌子實體成熟；

所述分離純化培養方法為：將生長于土表上成熟的炭角菌子實體輕輕用消毒的鑷子取下，無菌條件下先在75%酒精中浸蘸15～20秒，再在無菌水中涮10～15秒，用無菌濾紙吸干水，切成3～4個小段，每段分開接種于含誘導培養基的培養皿中，其所述的誘導培養基成份為：馬鈴薯200.00g/L、葡萄糖20.00g/L、MgSO₄1.00g/L、14.5～16.0波美的麥芽汁130～150ml、瓊脂12.00g/L，控制PH值為5.0～5.2，培養溫度為22～24℃，暗培養5～7天，培養皿表面長出大量灰白色菌絲，6～8天轉接一次，轉接4～6次，即得到純的菌絲體；將菌絲體轉入含固體培養基的500ml三角瓶中，10～15天即會長出炭角菌子實體，其所述的固體培養基成分為：馬鈴薯200.00g/L、葡萄糖20.00g/L、巢土20～30g/L、14.5～16.0波美的麥芽汁130～150ml、瓊脂12.00g/L，控制PH值為5.0～5.2。