[發(fā)明專(zhuān)利]蜂王漿中得到王漿主蛋白和活性濾后液的超濾膜分離方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410013192.X
• 申請(qǐng)日: 2014-01-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103772497A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈立榮;李玫璐;于張穎;周志軍;譚量量;趙敏潔;尹志紅;裘衛(wèi)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江大學(xué);杭州碧于天保健品有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/435
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/435;C07K1/34;A23L2/38
• 代理公司: 杭州求是專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及超濾和免疫學(xué)領(lǐng)域，特別地，本發(fā)明涉及一種蜂王漿中分離得到王漿主蛋白和活性濾后液的方法。

背景技術(shù)

蜂王漿（Royal?Jelly）是由6～12日齡工蜂頭部的王漿腺(舌腺和鄂腺)分泌，用于喂養(yǎng)飼喂蜂王及幼蟲(chóng)的特殊乳漿狀物質(zhì)，又名蜂乳、皇漿。蜂王漿含有豐富的蛋白質(zhì)，其中主要水溶性蛋白，即王漿主蛋白(Major?Royal?Jelly?Proteins，MRJPs)占蜂王漿中總蛋白質(zhì)的46%～89%。MRJPs包括MRJP1～9九種蛋白，分子量為49～87kDa，其中含量最為豐富的是MRJP1，占50%左右。MRJPs有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、抗腫瘤、抗菌等生理功能與營(yíng)養(yǎng)功效。2011年4月24日，日本富山縣立大學(xué)鐮倉(cāng)昌樹(shù)博士在《Nature》首次報(bào)道，蜂王漿中的一種57-kDa蛋白（也稱(chēng)Royalactin，即王漿主蛋白MRJP1單體）是使蜜蜂幼蟲(chóng)發(fā)育成蜂王的關(guān)鍵活性成分。近年來(lái)，MRJPs已成為國(guó)內(nèi)外科學(xué)家研究的熱點(diǎn)。此外，王漿含游離脂肪酸達(dá)26種以上，以10-羥基-2-癸烯酸(10-HDA)最為重要，也是王漿特有的成分，具有抗菌、抗病毒、抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)等多種功效，是國(guó)際上長(zhǎng)期以來(lái)評(píng)價(jià)王漿質(zhì)量的重要指標(biāo)。

之前已有用離子交換層析、疏水層析、尺寸排阻層析以及離心、透析分離純化蜂王漿活性蛋白的方法報(bào)道。如國(guó)內(nèi)藍(lán)瑞陽(yáng)等采用堿提酸沉法和鹽提酸沉法進(jìn)行了蜂王漿蛋白質(zhì)提取，從結(jié)果看存在產(chǎn)物純度低，對(duì)蛋白活性影響大，溶劑污染，副產(chǎn)物10-HAD無(wú)法利用等問(wèn)題（藍(lán)瑞陽(yáng)等，2008，蜜蜂雜志，(3):18-20）。日本學(xué)者Salazar-Olivo等用生理鹽水（PBS）低溫溶解王漿24h，低溫離心（4℃，12000g，30min）方法，從王漿分離出具有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的活性蛋白(Salazar-Olivo等,Toxicology?in?Vitro,2005,19:645-651)。但以往報(bào)道的方法普遍存在效率較低，只適合實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用，難以實(shí)現(xiàn)規(guī)模化和產(chǎn)業(yè)化。此外，我國(guó)和日本已利用蜂王漿開(kāi)發(fā)生產(chǎn)功能飲料，但都采用了有機(jī)溶劑脫蛋白工藝，造成王漿蛋白資源浪費(fèi)和環(huán)境污染[（劉進(jìn)等，食品研究與開(kāi)發(fā)，2003,24（6）53-55]。

超濾膜分離技術(shù)是一種借助外界能量或化學(xué)位的推動(dòng)，以選擇性透過(guò)膜為分離介質(zhì)，對(duì)兩組分或多組分氣體或液體進(jìn)行分離、分級(jí)和富集的膜分離方法。超濾膜孔徑為2～20nm,可分離相對(duì)分子質(zhì)量為數(shù)千至數(shù)百萬(wàn)的物質(zhì)如:蛋白質(zhì)、膠體、病毒、熱源、酶、多糖等。與傳統(tǒng)分離方法(蒸發(fā)、萃取或離子交換等)相比，超濾膜分離是在常溫下操作，沒(méi)有相變，最適宜對(duì)熱敏性物質(zhì)和生物活性物質(zhì)的分離與濃縮；具有高效、節(jié)能、工藝過(guò)程簡(jiǎn)單、投資少、污染小等優(yōu)點(diǎn)，在化工、輕工、電子、醫(yī)藥、紡織、生物工程、環(huán)境治理、冶金等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。