[發明專利]一種同時快速篩查鑒定乳制品中多種有機酸的離子色譜-高分辨質譜聯用方法

有效

• 申請號: 201410012038.0
• 申請日: 2014-01-10
• 公開（公告）號: CN103743849B
• 公開（公告）日: 2017-01-04
• 發明（設計）人: 云環;張春艷;劉鑫;盧華衛;鄭書展;潘國卿;王博
• 申請（專利權）人: 內蒙古出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心;北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司11257
• 代理人: 趙曉丹

技術領域

本發明屬于分析化學領域，具體涉及一種同時快速篩查鑒定乳制品中多種有機酸的離子色譜-高分辨質譜聯用方法。

背景技術

乳制品中的有機酸具有抑制有害菌的繁殖、提供不同風味的作用，在乳制品產品中廣泛存在。其主要來源分為生產添加和天然產物兩種途徑：生產加工過程常使用蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸、磷酸等作為酸度調節劑；天然有機酸主要是由乳脂肪水解產生自由脂肪酸如乙酸、丁酸，牛的生理代謝產生檸檬酸、乳清酸、尿酸，細菌及乳酸菌的分解代謝產生乳酸、乙酸、丙酮酸、丙酸、甲酸，同型乳酸發酵將幾乎全部的碳源經丙酮酸代謝轉化為乳酸，也可以產生其它有機酸及風味代謝產物。

由于其相對較高的安全性，除富馬酸外，我國的國家標準中對這些有機酸的使用并沒有限量規定，最大使用量為“根據生產需要”而定。但實驗研究表明，長期食用或食入過量有機酸同樣會對人體產生損害，秦淑貞等在小鼠中進行的急性毒性試驗結果顯示：檸檬酸本身毒性輕微，但與重金屬螯合后會導致肝細胞彌漫性壞死，肝小葉消失。

為避免在食品生產過程中不法商販無限制、無量的使用有機酸，世界上很多組織和國家都對有機酸的使用范圍和限量都作了相應規定：國際食品法典委員會（ACA）規定水果汁中檸檬酸限量3000mg/kg，酒石酸限量4000mg/kg，嬰幼兒的補充食品中乳酸限量2000mg/kg，乙酸限量5000mg/kg，生面制品、面條中富馬酸限量700mg/kg；歐盟規定干制粉狀甜品混合物中富馬酸限量4000g/kg，餅干和面包干中酒石酸限量5000g/kg；我國臺灣尤其單獨規定嬰兒食品中不得使用蘋果酸。

目前，食品、環境、化工、醫學等領域的檢測技術中，針對陰離子、陽離子、水溶性和極性小分子化合物常采用離子色譜分析技術。但是，離子色譜儀檢測時間較長，通常為40-60min，且僅憑保留時間作為定性定量依據，無法提供結構信息，對于保留時間相同的物質無法進一步進行結構上的確認，從而易導致假陽性結果。

質譜技術可以在分析過程中提供更準確的定性定量檢測，近年來有關離子色譜質譜聯用技術已有報道，法蕓等利用毛細管離子色譜質譜聯用分析裝置進行有機酸、糖、醇等水溶性組分的分析，但其采用的低分辨質譜僅能對已提供標準品的既定化合物進行分析，無法對難以獲取標準物質的、或無法規要求的非既定化合物進行篩查，難以滿足當今世界各地法律法規頻繁更新的檢測要求；且低分辨質譜在采集開始前即已設定參數，一旦采集無法反復調用多層數據。

高分辨質譜具有質量分辨率高和精確分子量的功能，因此對樣品前處理的要求降低，有效的節省了樣品前處理時間；且由于其高分辨的優勢，無需在色譜分離上進行分段分離即可將待測組分識別，色譜分離時間由此由原來的50-60min縮短為30min左右；高分辨質譜在全掃描模式下采集的數據可以根據檢測需求反復調用，在不提供標準物質的情況下仍然能夠進行篩查分析，由此彌補傳統低分辨質譜方法的不足；其數據依賴性掃描可以在篩查的同時，通過碎片離子進行定性確證。近年來通過與液相色譜串聯的方式在食品檢測、蛋白質組學等方面已開始逐漸應用，但在與離子色譜串聯應用的檢測領域尚屬空白。

發明內容

本發明提供一種同時快速篩查鑒定乳制品中多種有機酸的離子色譜-高分辨質譜聯用方法。

一種同時快速篩查鑒定乳制品中多種有機酸的離子色譜-高分辨質譜聯用方法，包括以下步驟：

將待測樣品用氫氧化鉀溶液提取，提取液用反相填料前處理小柱凈化，使用IonPac?AS19色譜柱分離，KOH淋洗液洗脫，之后在負離子模式下用Orbitrap高分辨檢測器全掃描模式檢測，根據測得的數據進行篩查和鑒定；

優選地，色譜條件為：

柱溫：35℃；

流速：0.25mL/min；

流動相：30mM?KOH；

質譜條件為：

電噴霧離子源；

噴霧電壓：5.00kV

質荷比范圍：50-300

毛細管電壓：-21.00V

管透鏡電壓：-128.70V

毛細管溫度：350℃；

鞘氣(N2)流速：17L/min(即30arb)；

輔助氣(N2)流速：8L/min(即10arb)；

分辨率R=60000。

進一步地，氫氧化鉀溶液的質量濃度為1％。

進一步地，所述反相填料前處理小柱是RP前處理小柱。