[發明專利]一種非cry基因啟動子指導的Cry蛋白表達載體、構建方法及其應用

有效

• 申請號: 201410010899.5
• 申請日: 2014-01-09
• 公開（公告）號: CN103740748A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 彭琦;宋福平;束長龍;耿麗麗;黃大昉;張杰
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N15/75
• 分類號: C12N15/75;C12N15/66;C12N1/21;C12R1/07
• 代理公司: 北京兆君聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 胡敬紅

1.一種表達載體，其結構特征為：將exsY基因啟動子PexsY與cry基因融合，重疊片段插入經酶切后的骨架載體pHT315的多克隆位點之間，所述啟動子PexsY的序列如SEQ?ID?NO9所示。

2.權利要求1所述表達載體，為pHT315-PexsY-1Ac，所述cry基因為cry1Ac基因，其序列如SEQ?IDNO1所示。

3.權利要求2所述表達載體pHT315-PexsY-1Ac的構建方法，包括如下步驟：

（1）獲得exsY高活性的啟動子和cry1Ac基因融合的重疊片段PexsY-1Ac，

（2）插入經酶切后的骨架載體pHT315的多克隆位點之間。

4.根據權利要求3所述的構建方法，所述步驟（1）的方法為：以Bt?HD73菌株基因組DNA為模板，用引物對PexsY-F/PexsY-R擴增exsY基因ATG上游410bp和下游165bp的片段，大小為578bp；以Bt?HD73菌株基因組DNA為模板，用引物對1Ac-F/1Ac-R擴增cry1Ac基因及其SD序列GGAGG，大小為3562bp；回收兩個PCR產物，以此為模板，用引物PexsY-F和1Ac-R進行重疊PCR，獲得重疊片段PexsY-1Ac，大小為4140bp；

所述引物PexsY-F為：GCGTCGACCGGTTCCGCAACGATA，

所述引物PexsY-R為：CATAAGTTACCTCCATCTTTAAGGGCGTGTATTTGC，

所述引物1Ac-F為：GCAAATACACGCCCTTAAAGATGGAGGTAACTTATG，

所述引物1Ac-R為：ACATGCATGCTTGCATGAGACTATTCCT。

5.根據權利要求4所述的構建方法，所述步驟（2）中的骨架載體pHT315經Sal?I/SphI雙酶切。

6.一種工程菌菌株，其特征是含有權利要求1或2所述的表達載體。

7.exsY基因啟動子PexsY在指導Cry蛋白表達中的應用。

8.根據權利要求7所述應用，為將含有啟動子PexsY和cry基因的表達載體轉入宿主菌株中進行Cry蛋白表達。

9.根據權利要求8所述應用，所述表達載體為權利要求1或2所述的表述載體。