[發明專利]一種抗鴨病毒性肝炎山豆根多糖及其分子修飾物

有效

• 申請號: 201410009323.7
• 申請日: 2014-01-09
• 公開（公告）號: CN103739733A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 劉家國;陳云;熊文;曾玲;徐美云;王德云;胡元亮;武毅;黃兵;馬秀麗
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P31/14
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一、技術領域

本發明涉及一種抗鴨病毒性肝炎山豆根多糖及其分子修飾物，屬于中獸藥制備技術領域。

二、背景技術

鴨病毒性肝炎是鴨肝炎病毒(DHV)感染引起的一種傳播迅速、高發病率、高致死性疫病。1949年首次分離到該病毒，目前已呈全世界范圍分布。DHV主要存在DHV-1及其變異株、Duck?Astrovirus以及DHV-3三個血清型，其中DHV-1型毒性最強、分布最廣，主要侵染3周齡以內的雛鴨，病死率高于80％，甚至可高達100％，是嚴重危害養鴨業主要病原之一。

目前，世界范圍內臨床上還沒有有效的抗DHV-1藥物，主要通過對種鴨或雛鴨注射弱毒苗進行免疫防御。臨床病例一旦出現，即造成難以挽回的損失。1958年Gerber等首先發現海藻多糖具有抗病毒作用，此后多種多糖及硫酸化多糖的抗病毒作用陸續被報道。近年來，本實驗室也發現了黃芪、香菇、當歸等多種中藥多糖能顯著抵抗新城疫、傳染性法氏囊病等病毒的感染。中藥化合物結構修飾是提高其水溶性和生物活性的主要手段之一。許多學者發現，中藥多糖成分、皂苷等成分硫酸化或磷酸化修飾后，使其成酯化物，其水溶性普遍增加，免疫藥理作用明顯增強。

山豆根是一種經典的清熱解毒用中藥。現代藥理學研究表明，山豆根多糖是其主要有效成分之一，具有良好的抗氧化作用。雖然有學者發現，經過硫酸化修飾的硫酸化山豆根多糖在體外對肝炎病毒表現出良好的抑制作用。但由于不同的藥物對同一種病毒的作用并不一致，同一種藥物對不同的病毒也表現出不同的作用。我們發現，按照不同的條件修飾中藥多糖所獲得的多糖成分修飾物也有所不同，其作用大相徑庭。為研究有效的抗鴨病毒性肝炎藥物，我們根據前期的預試驗，將分離獲得并經在體試驗驗證有效的山豆根多糖采用氯磺酸吡啶法進行了修飾，并采用正交試驗比較優化了其制備工藝，以進一步提高其生物活性和生物利用率。

本發明首次將山豆根多糖抗鴨病毒性肝炎有效部位進行硫酸化分子修飾，并采用正交法優化了抗鴨病毒性肝炎山豆根多糖活性部位硫酸化分子修飾條件，發現硫酸化分子修飾能顯著增加山豆根多糖抗鴨病毒性肝炎效果，提高其生物利用度，并獲得較高的產物得率。

三、發明內容

技術問題本發明針對世界范圍內臨床上還沒有有效的抗鴨病毒性肝炎藥物問題，提供一種山豆根多糖抗鴨病毒性肝炎有效部位的硫酸化分子修飾方法，所獲得的山豆根多糖硫酸酯(sBSRPS₆₅)總糖含量達83.77％，硫酸根含量為39.33％，產物得率達117.33％，且對鴨病毒性肝炎的治療作用明顯提高，可望最終應用于鴨病毒性肝炎的臨床防治。

技術方案

采用水煎醇沉法，收集不同醇沉部位山豆根多糖，經數次臨床試驗發現山豆根多糖乙醇濃度65％醇沉部分(BSRPS₆₅)對鴨病毒性肝炎有較理想的治療效果，再用正交試驗法對BSRPS₆₅的硫酸化分子修飾方法進行優化。經優化后的山豆根多糖抗鴨病毒性肝炎有效部位的硫酸化分子修飾方法為：將帶有攪拌裝置的三頸燒瓶置于冰中，加入無水吡啶20mL，劇烈攪拌，使之充分冷卻，按氯磺酸-吡啶的配比為1∶5的比例將氯磺酸逐滴緩慢加入，冷卻后于65～95℃水浴鍋上融化成淡黃色液體。精密稱取抗鴨病毒性肝炎山豆根多糖活性部位(BSRPS₆₅)300mg，加入酯化試劑，95℃反應2h。反應結束后立即加入100mL冰水，用飽和氫氧化鈉溶液(20.0mol／L)調pH至7后放入透析袋中，用自來水流水透析2d、蒸餾水流水透析1d，將透析袋中的硫酸化多糖濃縮并冷凍干燥后得硫酸化山豆根多糖。經Nicolet?FT-IR200型傅立葉變換紅外光譜儀分析為山豆根多糖硫酸酯(sBSRPS₆₅)。按此方法制備的山豆根多糖硫酸酯總糖含量達83.77％，硫酸根含量為39.33％，產物得率達117.33％，入水即溶。對體外培養的鴨胚肝細胞的毒性顯著降低。

有益效果