[發明專利]貝類中大田軟海綿酸的電化學檢測方法

有效

• 申請號: 201410009128.4
• 申請日: 2014-01-09
• 公開（公告）號: CN103713035A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 郭萌萌;譚志軍;吳海燕;李兆新;王聯珠;翟毓秀
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 李素紅

1.一種貝類中大田軟海綿酸的電化學檢測方法，其特征是包括以下步驟:

（1）金電極的預處理：金電極打磨、清洗，再用piranha溶液浸泡，在稀H₂SO₄溶液中于-1.0～1.55V電位下循環掃描，取出后用水沖洗，吹干；

（2）傳感器的制備：將步驟（1）處理后的金電極置于含有終濃度分別為1mmol/L硫堇、4mmol/L亞甲基藍、0.1mol/L氯化鉀和pH6.010mmol/L?PBS緩沖液的混合溶液中，于+1.5V恒電位下靜置，然后用循環伏安法掃描，形成硫堇-亞甲基藍復合聚合膜；用水充分淋洗金電極后，將其浸于納米金溶液中，以在金電極上獲得納米金層；取大田軟海綿酸單克隆抗體涂覆在金電極表面，室溫下反應；滴加牛血清白蛋白溶液以覆蓋多余的非特異性位點，即完成傳感器的制備；

（3）大田軟海綿酸的測定：將不同濃度梯度的大田軟海綿酸標準溶液或樣品溶液滴加到步驟（2）所制備的傳感器表面，反應后，使用電化學工作站進行差示脈沖伏安測量，記錄免疫反應前后峰電流值。

2.根據權利要求1所述的電化學檢測方法，其特征在于步驟（2）所述納米金溶液的合成方法為取HAuCl₄溶液加熱煮沸，在攪拌回流狀態下迅速加入檸檬酸三鈉水溶液，繼續煮沸，待溶液變為深酒紅色時，即完成納米金溶液的合成，其中HAuCl₄與檸檬酸三鈉的質量比為1：3。

3.根據權利要求2所述的電化學檢測方法，其特征在于所述的HAuCl₄和檸檬酸三鈉的濃度分別為0.01%（重量比）、1%（重量比）。

4.根據權利要求1所述的電化學檢測方法，其特征在于步驟（1）所述的金電極用0.05μm鋁粉打磨，對打磨后的金電極清洗是依次用超純水、無水乙醇和超純水超聲清洗。

5.根據權利要求1所述的電化學檢測方法，其特征在于步驟（2）所述的循環伏安法掃描的條件是-0.45～0.15V電位、50mV/s速率下掃描25圈。

6.根據權利要求1所述的電化學檢測方法，其特征在于步驟（2）所述的大田軟海綿酸單克隆抗體溶液濃度為0.1mg/mL，所用的體積為20μL，所述滴加的BSA溶液濃度為0.5%（重量比），體積為20μL。

7.根據權利要求1所述的電化學檢測方法，其特征在于步驟（3）中所述樣品溶液的制備為稱取貝樣，加入甲醇水溶液均質提取，離心后定容；取提取液用氮氣吹干，用PBS緩沖溶液定容，超聲波震蕩使殘留物充分溶解，溶解液過濾膜后待測。

8.根據權利要求1所述的電化學檢測方法，其特征在于步驟（3）中電化學工作站為三電極工作模式，其中所述步驟（2）制備的傳感器作為工作電極，鉑電極為對電極，飽和甘汞電極為參比電極。

9.根據權利要求1所述的電化學檢測方法，其特征在于步驟（3）中所述的差示脈沖伏安法測量的脈沖范圍是-0.6～0.6V。

10.根據權利要求1所述的電化學檢測方法，其特征在于步驟（3）中所述的大田軟海綿酸標準溶液濃度分別為：0.2、2、10、20和100μg/L，滴加大田軟海綿酸標準溶液所測電流差值與大田軟海綿酸標準溶液濃度的對數呈線性關系，并繪制工作曲線；滴加樣品溶液后記錄其電流的變化值，根據所得到的工作曲線，計算貝類樣品中大田軟海綿酸的含量。