[發(fā)明專利]溪黃草藥材HPLC指紋圖譜的建立及其指紋圖譜

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410008547.6
• 申請(qǐng)日: 2014-01-08
• 公開（公告）號(hào): CN103776926A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賴小平;黃松;蔣東旭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東莞廣州中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥數(shù)理工程研究院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥藥材的質(zhì)量控制方法，具體涉及溪黃草藥材高效液相色譜法指紋圖譜的構(gòu)建方法和標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

背景技術(shù)

溪黃草原植物為唇形科香茶菜屬植物線紋香茶菜Isodon?lophanthoides(Buch.-Ham.ex?D.Don)H.Hara.的干燥地上部分。主產(chǎn)于長(zhǎng)江以南的湖南、湖北、四川、云南、江西、廣東、廣西、福建等省區(qū)。性味苦、甘、寒,歸肝、膽經(jīng)，具有清熱利濕、退黃、涼血散瘀的功效，用于治療濕熱黃疸、濕熱瀉痢、跌打瘀痛、急性黃疸型肝炎、急性膽囊炎、痢疾、腸炎等疾病。

溪黃草為華南地區(qū)民間習(xí)用草藥。溪黃草作為清肝利膽藥在廣東大部分地區(qū)民間有著很長(zhǎng)的使用歷史。民間和歷代名醫(yī)把溪黃草用作清熱祛濕、利膽退黃藥，治療急性黃疸型肝炎、急性膽囊炎，為預(yù)防和治療肝膽疾病的常用藥。

現(xiàn)作商品“溪黃草”入藥的除線紋香茶菜外，還有同屬植物狹基線紋香茶菜R.lophanthoides(Buch.-Ham?ex?D.Don)Hara?var.gerardiana(Benth.)Hara、纖花香茶菜R.lophanthoides(Buch.-Ham?ex?D.Don)Hara?var.gracilifl?ora(Benth.)Hara和溪黃草R.serra(Maxim.)Hara。廣東部頒標(biāo)準(zhǔn)和國家藥典2010版（附錄）對(duì)溪黃草的基源收載以及學(xué)者間都存在爭(zhēng)議。中藥溪黃草來源復(fù)雜，同名異物、品種混亂普遍，且這類植物外形類似，開花前和干品都不易鑒別。為保證和提高藥材質(zhì)量，促進(jìn)中藥標(biāo)準(zhǔn)化，在研究過程中應(yīng)重視對(duì)所用藥材作基源鑒定；并應(yīng)對(duì)多來源藥材在鑒定、化學(xué)、藥理和臨床進(jìn)一步比較研究，以便在各種藥材之間找出功效、主效異同點(diǎn)，為臨床用藥的安全、有效提供準(zhǔn)確可靠的依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的為溪黃草藥材的質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別提供一個(gè)新的方法，通過建立溪黃草藥材指紋圖譜的方法，并由此方法得到溪黃草藥材共有模式的指紋圖譜。

為達(dá)到本發(fā)明的目的所采用的技術(shù)方案：用高效液相色譜法建立溪黃草藥材指紋圖譜的方法，具體包括如下步驟：

①、對(duì)照品溶液的制備：精密稱取對(duì)照品咖啡酸、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素、牡荊苷和迷迭香酸，以甲醇為溶劑，配成咖啡酸濃度為0.092mg/mL、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素為0.238mg/mL、牡荊苷為0.179mg/mL和迷迭香酸為0.115mg/mL的混合對(duì)照品溶液。；

②、樣品溶液的制備：精密稱定溪黃草藥材粉末，精密加入50%乙醇20mL,稱搖勻，濾過，作為供試品溶液；

③、色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動(dòng)相為乙腈-磷酸組成的梯度洗脫液，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為230～270nm；

④、測(cè)定：精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到指紋圖譜。

進(jìn)一步優(yōu)選的方法可以通過下述步驟實(shí)施：

①、對(duì)照品溶液的制備：精密稱取對(duì)照品咖啡酸、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素、牡荊苷和迷迭香酸，以甲醇為溶劑，配成咖啡酸濃度為0.092mg/mL、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素為0.238mg/mL、牡荊苷為0.179mg/mL和迷迭香酸為0.115mg/mL的混合對(duì)照品溶液。；

②、樣品溶液的制備，取溪黃草藥材粉末1.0g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇20mL,稱定重量，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，用0.22μm微孔濾膜濾過，作為樣品溶液；

所述步驟；

③、色譜條件，色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動(dòng)相為0.1%～0.3%乙腈-磷酸組成的梯度洗脫液，柱溫：25～40℃，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為230～270nm，時(shí)間100～120min；

④、測(cè)定，采用精密吸取樣品溶液10～20μL注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測(cè)定，得到指紋圖譜。

本發(fā)明最佳的檢測(cè)方法可以通過下述步驟實(shí)施: