[發明專利]溪黃草藥材HPLC指紋圖譜的建立及其指紋圖譜

有效

• 申請號: 201410008547.6
• 申請日: 2014-01-08
• 公開（公告）號: CN103776926A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 賴小平;黃松;蔣東旭
• 申請（專利權）人: 東莞廣州中醫藥大學中醫藥數理工程研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種溪黃草藥材指紋圖譜的建立方法，其特征在于采用高效液相色譜法，具體包括如下步驟：

①、對照品溶液的制備：精密稱取對照品咖啡酸、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素、牡荊苷和迷迭香酸，以甲醇為溶劑，配成咖啡酸濃度為0.092mg/mL、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素為0.238mg/mL、牡荊苷為0.179mg/mL和迷迭香酸為0.115mg/mL的混合對照品溶液；

②、樣品溶液的制備：準確稱定溪黃草藥材粉末，精密加入50%乙醇20mL，搖勻，濾過，作為供試品溶液；

③、色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為乙腈-磷酸組成的梯度洗脫液，紫外檢測波長為230～270nm；

④、測定：精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。

2.根據權利要求1所述的一種溪黃草藥材指紋圖譜的建立方法，其特征在于：

所述步驟②樣品溶液的制備，取溪黃草藥材粉末1.0g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇20mL，稱定重量，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，用0.22μm微孔濾膜濾過，作為供試品；

所述步驟③色譜條件，色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為乙腈-0.1%～0.3%磷酸組成的梯度洗脫液，柱溫：25～40℃，紫外檢測波長為230～270nm，時間100～120min；

所述步驟④測定，采用精密吸取樣品溶液10～20μL注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。

3.根據權利要求1所述的一種溪黃草藥材指紋圖譜的建立方法，其特征在于：

所述步驟②樣品溶液的制備，取溪黃草藥材粉末1.0g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇20mL，稱定重量，超聲提取30min，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，用0.22μm微孔濾膜濾過，作為樣品溶液；

所述步驟③色譜條件中流動相為乙腈-0.3%磷酸組成的梯度洗脫液，流速為0.8mL/min，柱溫：30℃，紫外檢測波長為254nm，分析時間120min。

4.根據權利要求2或3所述的一種溪黃草藥材指紋圖譜的建立方法，其特征在于：

所述步驟③色譜條件中所述的梯度洗脫，梯度洗脫程序以如下體積濃度配置進行：

0分鐘時，流動相A為8%的乙腈溶液、流動相B為92%的0.3%的磷酸溶液；

5分鐘時，流動相A為12%的乙腈溶液、流動相B為88%的0.3%的磷酸溶液；

30分鐘時，流動相A為18%的乙腈溶液、流動相B為82%的0.3%的磷酸溶液；

60分鐘時，流動相A為23%的乙腈溶液、流動相B為77%的0.3%的磷酸溶液；

80分鐘時，流動相A為50%的乙腈溶液、流動相B為50%的0.3%的磷酸溶液；

100分鐘時，流動相A為70%的乙腈溶液、流動相B為30%的0.3%的磷酸溶液；

120分鐘時，流動相A為90%的乙腈溶液、流動相B為10%的0.3%的磷酸溶液。

5.一種溪黃草藥材的指紋圖譜，其特征在于：

溪黃草藥材指紋圖譜的建立，具體包括如下步驟

①、對照品溶液的制備：精密稱取對照品咖啡酸、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素、牡荊苷和迷迭香酸，以甲醇為溶劑，配成咖啡酸濃度為0.092mg/mL、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素為0.238mg/mL、牡荊苷為0.179mg/mL和迷迭香酸為0.115mg/mL的混合對照品溶液；

②、樣品溶液的制備：精密稱定溪黃草藥材粉末，精密加入50%乙醇20mL，搖勻，濾過，作為供試品溶液；

③、色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，采用梯度洗脫，流動相為乙腈-磷酸組成的梯度洗脫液，紫外檢測波長為230～270nm；

④、測定：精密吸取供試品溶液注入高效液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。

6.一種溪黃草藥材的指紋圖譜，其特征在于：通過高效液相色譜儀獲得的指紋圖譜是聯合運用色譜峰保留時間（t）和二極陣列檢測器采集各色譜峰紫外光譜（UV）確定4個特征峰(見圖2和圖3)；其中，S4號峰（迷迭香酸）的峰高最高（見圖1），且均為4個品種溪黃草藥材均含有的色譜峰，峰面積最大，與相鄰峰分離度較好，在測定時比較穩定，因此選作參照峰；咖啡酸、6-C-吡喃阿拉伯糖基-8-C-吡喃葡萄糖基芹菜素、牡荊苷和迷迭香酸均為線紋香茶菜、狹基線紋香茶菜和纖花線紋香茶菜共有的色譜峰(分別為2-S1、3-S2、5-S3、9-S4峰)，而溪黃草僅有咖啡酸和迷迭香酸峰（分別為3-S1、15-S4峰）；指紋圖譜中特征峰的差異可作為區別溪黃草與正品線紋香茶的標準。