[發明專利]基于核殼量子點柔性偶聯標記物免疫層析試紙條的檢測方法無效

申請號：	201410008389.4	申請日：	2014-01-08
公開（公告）號：	CN103760363A	公開（公告）日：	2014-04-30
發明（設計）人：	曾慶輝;紀文宇	申請（專利權）人：	中國科學院長春光學精密機械與物理研究所
主分類號：	G01N33/68	分類號：	G01N33/68
代理公司：	長春菁華專利商標代理事務所 22210	代理人：	陶尊新
地址：	130033 吉***	國省代碼：	吉林;22
權利要求書：	查看更多	說明書：	查看更多
摘要：
搜索關鍵詞：	基于量子柔性標記免疫層析試紙檢測方法
鉆瓜網技術展會專利詞庫專利權人專利榜在售專利公布日期熱門專利

【說明書】：

技術領域

本發明屬于免疫檢測方法技術領域，具體涉及基于核殼量子點柔性偶聯標記物免疫層析試紙條的檢測方法。

背景技術

目前利用納米金顯色的檢測試紙條已被大量應用，其基本原理是以微孔膜為固相載體，包被檢測物的抗原或抗體，加入待測樣本后，經微孔膜的毛細管虹吸作用使樣本中檢測物與膜上包被的抗原或抗體結合，通過納米金標記物自身的顏色判定檢測結果。但是對于某些含量較低的樣本，納米金的顏色很淺，難于用肉眼來判斷結果，靈敏度低，只能定性檢測，不能定量分析。由于量子點具有激發譜線寬、發射譜線窄、量子尺寸效應、高熒光效率、強光化學穩定性等特性，可以替代膠體納米金進行生物標記，用高靈敏的熒光信號代替吸收顯色進行檢測。量子點試紙條既可以進行定性分析，又可以進行定量檢測。

經對現有技術的專利檢索發現，中國專利申請號200610024086.7的專利，利用量子點的特性，發明了一種量子點標記快速免疫層析試紙條的檢測方法，對待檢測物進行定性或半定量檢測，該發明通過改變量子點的粒徑或種類，得到不同波長的熒光，用不同類型的量子點標記不同的抗體，通過多色熒光信號進行多組分的檢測，方法簡單快速，成本低。然而量子點是一種納米材料，具有極大的表面效應，現有的利用量子點檢測的試紙條都是將量子點與抗體分子通過靜電吸附作用、直接共價連接等方式進行生物標記，在標記抗體的過程中，很容易標記到抗體的具有抗原決定簇部位的Fab端，標記后的抗體不能與抗原分子進行免疫反應，因而是一種無效的標記，這種直接連接技術對于最終的免疫檢測的靈敏度，尤其是特異性會有很大程度的影響，降低檢測效果，定量檢測靈敏度和特異性都無法達到滿意結果。而且現有的量子點試紙條專利都是利用裸核量子點進行免疫檢測，由于裸核量子點較核殼量子點的熒光特性會有很大的減弱，因而將其應用到試紙條免疫檢測，效果一定弱于用核殼量子點進行免疫檢測的結果。

發明內容

本發明的目的是為了提供一種基于核殼量子點柔性偶聯標記物免疫層析試紙條的檢測方法，該檢測方法具有較高的靈敏度和特異性。

本發明提供一種基于核殼量子點柔性偶聯標記物免疫層析試紙條的檢測方法，包括如下：

步驟一：制備核殼量子點；

步驟二：將步驟一得到的核殼量子點與蛋白G或蛋白A通過EDC縮合的方式進行共價連接，得到共價連接產物；

步驟三：將步驟二得到的共價連接產物與待檢測抗原分子的一個抗體分子混合，得到量子點抗體柔性偶聯的標記產物；

步驟四：將步驟三得到的量子點抗體柔性偶聯的標記產物涂在玻璃纖維素膜上，得到涂有標記產物的玻璃纖維素膜，將待檢測抗原分子的另一個抗體和二抗分別噴涂在硝酸纖維素膜上形成測試帶和控制帶，得到已平行包被抗體的硝酸纖維素膜；

步驟五：在單面聚酯或塑料板上，依次粘貼上玻璃纖維素濾膜、涂有標記產物的玻璃纖維素膜、吸水纖維素膜、已平行包被抗體的硝酸纖維素膜，將粘貼后的聚酯或塑料板制作得到免疫層析試紙條；

步驟六：將步驟五得到的免疫層析試紙條的墊端插入待測樣品溶液中，免疫層析后取出試紙條，確定檢測結果。

優選的是，所述的核殼量子點為CdTe/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnSe或CdSe/ZnS核殼量子點。

優選的是，所述的共價連接產物與待檢測抗原分子的一個抗體分子的摩爾比為1：1。

優選的是，所述的步驟四中，測試帶和控制帶平行設置，測試帶和控制帶的間隔為8-12mm。