[發(fā)明專利]載脂蛋白AⅠ抗血清的制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410004059.8 | 申請日： | 2014-01-06 |
| 公開（公告）號： | CN104017076A | 公開（公告）日： | 2014-09-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 楊昌國 | 申請（專利權(quán)）人： | 寧波博泰生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | C07K16/18 | 分類號： | C07K16/18;C07K16/06 |
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| 地址： | 315000 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 脂蛋白 血清 制備 方法 | ||
1.一種載脂蛋白AⅠ抗血清的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：
1)?高密度脂蛋白的提取：將用于制備載脂蛋白AⅠ的血清通過濃度為6%-22%的多陰離子化合物和濃度為2-6mol/L的二價金屬離子處理后提純獲得高密度脂蛋白；
2)?載脂蛋白AⅠ的提取：將獲得的高密度脂蛋白通過濃度為4-10mol/L鹽酸胍處理后經(jīng)過超速離心、梯度層析，獲得載脂蛋白AⅠ；
3)?載脂蛋白AⅠ抗血清的制備：將載脂蛋白AⅠ作為抗原，對免疫動物進行免疫反應(yīng)，制備載脂蛋白AⅠ抗血清。
2.如權(quán)利要求1所述的載脂蛋白AⅠ抗血清的制備方法，其特征在于：所述第1)步驟中，所述用于制備載脂蛋白AⅠ的血清通過多陰離子化合物和二價金屬離子處理后，需再經(jīng)過濃度為0.3-1mol/L的草酸鉀沉淀除去多陰離子化合物和二價金屬離子，獲得高密度脂蛋白粗品。
3.如權(quán)利要求2所述的載脂蛋白AⅠ抗血清的制備方法，其特征在于：所述獲得的高密度脂蛋白粗品,需進一步用超速離心提純時將密度范圍縮小到1.075-1.190?d。
4.如權(quán)利要求2所述的載脂蛋白AⅠ抗血清的制備方法，其特征在于：所述獲得的高密度脂蛋白粗品需依次經(jīng)過溴化鉀進行密度調(diào)節(jié)，然后用生理鹽水透析后，離心，提純，獲得高密度脂蛋白純品。
5.如權(quán)利要求2所述的載脂蛋白AⅠ抗血清的制備方法，其特征在于：所述血清中多陰離子化合物、二價金屬離子和草酸鉀殘留的濃度依次分別為6%、0.3mol/L和0.03mol/L。
6.?如權(quán)利要求1所述的載脂蛋白AⅠ抗血清的制備方法，其特征在于：?所述第2)步驟所述的鹽酸胍處理包括將高密度脂蛋白依次通過鹽酸胍、溴化鉀、生理鹽水和濃度為5-11mol/L的尿素進行處理。
7.如權(quán)利要求6所述的載脂蛋白AⅠ抗血清的制備方法，其特征在于：所述經(jīng)過鹽酸胍處理的高密度脂蛋白通過凝膠柱層析純化獲取載脂蛋白AⅠ，并將載脂蛋白AⅠ進行冰凍保存。
8.如權(quán)利要求7所述的載脂蛋白AⅠ抗血清的制備方法，其特征在于：所述冰凍保存的溫度為零下20℃至零下80℃。
9.如權(quán)利要求1所述的載脂蛋白AⅠ抗血清的制備方法，其特征在于：所述第3)步驟中，所述作用在免疫動物上的載脂蛋白AⅠ的量為每次8?–?14mg/每只免疫動物。
10.如權(quán)利要求1-9任意一項所述的載脂蛋白AⅠ抗血清的制備方法，其特征在于：所述用于制備載脂蛋白AⅠ的血清均通過乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒表面抗體以及人類免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗體檢測，且檢測結(jié)果須呈陰性。
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