[發明專利]一種春蘭與大花蕙蘭雜交種育苗的方法

有效

• 申請號: 201410002480.5
• 申請日: 2014-01-03
• 公開（公告）號: CN103704130A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 孫葉;包建忠;劉春貴;李風童;馬輝;陶凡;張甜;張靚;陳秀蘭
• 申請（專利權）人: 江蘇里下河地區農業科學研究所
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H4/00
• 代理公司: 揚州市錦江專利事務所 32106
• 代理人: 江平

1.一種春蘭與大花蕙蘭雜交種育苗的方法，其特征在于以春蘭為母本，大花蕙蘭為父本，母本在開花2天后去雄，父本取開花后3～5天的花粉，通過人工授粉獲得雜交種，在雜交種的蒴果未開裂前采收，經表面消毒和種子用營養液前處理后進行無菌播種，經暗培養種子萌發、種子直接成苗或原球莖增殖，原球莖再經芽誘導、根誘導、組培苗煉苗，然后進行溫室栽培。

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于所述無菌播種是：將未開裂的蒴果表面用質量分數為75%的酒精消毒后，以質量分數為0.1%的HgCl水溶液浸泡10分鐘后取出，再浸入質量分數為95%的酒精內，取出蒴果立即在酒精燈上點燃，待蒴果表面酒精燃燒完后，切開蒴果，取出種子，放入裝有營養液的玻璃試劑瓶內，振蕩10～20分鐘后，將種子用無菌不銹鋼小勺均勻分散于培養基表面。

3.根據權利要求2所述方法，其特征在于所述營養液中含有1/2MS、萘乙酸0.5mg/l、蔗糖20g/l和蛋白胨0.5g/l，營養液的pH值為5.25～5.3；播種用培養基中含有1/2MS、萘乙酸0.5mg/l、蔗糖20g/l、活性碳0.5g/l、蛋白胨0.5g/l?和瓊脂6g/l，培養基的pH值為5.25～5.3。

4.根據權利要求1所述方法，其特征在于所述暗培養種子萌發是：將連同培養基的種子置于無光、培養溫度為23±0.2℃的環境溫度下放置。

5.根據權利要求1所述方法，其特征在于所述原球莖增殖是：待原球莖萌發至長度為2～5mm時，原球莖材料每隔60天轉入一次增殖培養基，轉入增殖培養基后將玻璃瓶置于溫度為23±0.2℃的環境中，并且光照8小時/天，光照強度為1500lux±100?lux；所述增殖培養基中含有1/2MS、2,4-D2mg/l、蔗糖20g/l、活性碳0.5g/l、蛋白胨0.5g/l?和瓊脂6g/l，所述增殖培養基的pH值為5.25～5.3。

6.根據權利要求1所述方法，其特征在于所述種子直接成苗是：待原球莖萌發的幼芽長度為2～5mm時，轉入二次培養基；所述二次培養基中含1/2MS、萘乙酸0.5mg/l、蔗糖20g/l、活性碳0.5g/l、蛋白胨0.5g/l?和瓊脂6g/l，二次培養基的pH值為5.25～5.3。

7.根據權利要求1所述方法，其特征在于所述莖誘芽是：待原球莖萌發的幼芽長度為1～2cm時，向玻璃瓶內轉入誘芽培養基，置于23±0.2℃的環境中2～3個月，期間光照12小時/天，光照強度為2000lux±100?lux；所述誘芽培養基中含1/2MS、萘乙酸0.1mg/l、6-BA1mg/l?、蔗糖20g/l、蛋白胨0.5g/l?和瓊脂6g/l，所述誘芽培養基的pH值為5.25～5.3。

8.根據權利要求1所述方法，其特征在于所述根誘導是：待原球莖萌發的幼芽長度為2～3cm時，轉入生根壯苗培養基，置于23±0.2℃的環境中，并且光照10小時/天，光照強度1500lux±100?lux；所述生根壯苗培養基中含1/2MS、萘乙酸0.5mg/l、6-BA0.5mg/l?、蔗糖20g/l、蛋白胨0.5g/l?、活性碳0.5g/l?和瓊脂6g/l，所述生根壯苗培養基的pH值為5.25～5.3。

9.根據權利要求1所述方法，其特征在于所述組培苗移栽煉苗是：在小苗生長至8～10?cm、形成3～4個葉片、根長5～8?cm、根數2～3條時出瓶移栽至移栽基質，移栽后澆透水，置于光照10小時/天、光照強度2000lux±100?lux、溫度為20～25℃、濕度為80～85%的環境中；所述移栽基質由小號松鱗和珍珠巖以質量比為8:2的比例混合。

10.根據權利要求1所述方法，其特征在于所述溫室栽培的溫度條件為18～30℃，濕度為75～85%，自然光照，每3～5天澆一次透水，溫室保持良好通透性，噴施廣譜性殺菌劑殺蟲劑，每一星期噴施1次1/2MS培養液或濃度為1‰的蘭菌王。