[發明專利]一種用于監測漆酶構象變化的免標記紫外吸收光譜法

有效

• 申請號: 201410002215.7
• 申請日: 2014-01-03
• 公開（公告）號: CN103712934A
• 公開（公告）日: 2014-04-09
• 發明（設計）人: 邱素艷;林振宇;周瑤敏;羅林廣;陳國南
• 申請（專利權）人: 江西省農業科學院農產品質量安全與標準研究所
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 江西省專利事務所 36100
• 代理人: 張文

1.一種用于監測漆酶構象變化的免標記紫外吸收光譜法，特征是：具體步驟如下：

（1）按照參考文獻（Sivakumar,?K.;?Xie,?F.;?Cash,?B.?M.?et?al.,?A?Fluorogenic?1,3-Dipolar?Cycloaddition?Reaction?of?3-Azidocoumarins?and?Acetylenes.?Org.?Lett.,?2004,?6,?4603-4606.）所示的方法，采用二羥基苯甲醛、N-乙酰甘氨酸和疊氮化鈉制備3-疊氮-7-羥基香豆素；

（2）將5.0?μL?10?mg/mL的漆酶和5.0?μL?0.25?mM?3-疊氮-7-羥基香豆素分別加入至九種不同濃度且均為190?μL的尿素溶液中，九種尿素溶液的具體濃度分別為0.0?M、1.0?M、2.0?M、3.0?M、4.0?M、5.0?M、6.0?M、7.0?M、8.0?M，在4?^oC下培育1.0小時，混合后攪拌均勻，促使尿素對漆酶產生變性作用，引起漆酶構象變化；

（3）在步驟（2）反應結束后，采用紫外光譜儀在400~700?nm范圍內分別采集步驟（2）中九種反應后的尿素溶液的吸收光譜；

（4）根據九種尿素溶液的尿素濃度和紫外吸收強度，繪制漆酶在不同尿素濃度條件下的紫外吸收光譜變化趨勢圖，根據該紫外吸收光譜變化趨勢圖就能監測漆酶構象變化。

2.根據權利要求1所述的免標記紫外吸收光譜法，特征在于：步驟（2）中所述的尿素溶液是由尿素溶解在乙酸緩沖液中配制而成，并將pH值調制為6.0。

3.根據權利要求1所述的免標記紫外吸收光譜法，特征在于：采用紫外光譜儀采集的是步驟（2）中所述的含有3-疊氮-7-羥基香豆素、漆酶和尿素三種物質的混合溶液的吸收光譜。