[發明專利]GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法及使用方法

有效

• 申請號: 201410001099.7
• 申請日: 2014-01-03
• 公開（公告）號: CN103704203B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發明（設計）人: 桑國俊;邱忠玉;郭海龍;王珂;容維中;保國俊
• 申請（專利權）人: 甘肅省畜牧獸醫研究所
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明屬于牛人工授精技術領域，尤其涉及一種GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法及使用方法。

背景技術

牛的繁殖方式包括本交和人工授精，人工授精又分鮮配和凍配，利用細管凍精進行遠程和集中實施人工授精是最主要的牛群繁殖方式。因此，細管凍精的質量是確保人工授精受胎率的關鍵環節。細管凍精的質量受供精公牛健康狀況、飼養水平、精液品質、細管凍精制作環節和保存條件的影響，這些環節中除細管凍精制作外都可以進行人工控制，而細管凍精制作環節受冷凍液、冷凍方法的影響較大。常規冷凍液的冷凍保護劑為甘油和卵黃，在應用中存在粘度過大、卵黃脂肪顆粒大而不均勻，影響精子運動速率和受胎率。

在其它細胞和胚胎冷凍技術研究過程中，發現緩沖劑三羥基氨基甲烷（tris）緩沖作用明顯，丙酮酸鈉可以滿足細胞和胚胎生長發育的部分能量，對其發育發揮了顯著作用。我們利用這兩種物質的生化特性，將其引入牛精液的稀釋和冷凍保護體系中，并通過嚴格試驗測定，證明它們確實對牛精液的稀釋和保護有明顯作用。

現有技術的缺點：

1、稀釋液顆粒大、粘度高。現有技術的稀釋液以卵黃為主，卵黃未進行處理而直接使用，因卵黃顆粒大，致使稀釋精液和冷凍精液中的團狀顆粒增加，精子往往圍繞團狀顆粒聚集和運動，降低了精子的運動速度，減少了游離精子，也減少了向卵子運動精子的數量。

2、操作技術復雜。現有技術的操作技術過于復雜，只適于工廠化生產，不適合小范圍使用。

發明內容

本發明實施例的目的在于提供一種GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法及使用方法，旨在解決現有的牛精液稀釋液顆粒大、粘度高；操作技術復雜的問題。

本發明實施例是這樣實現的，一種GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法，該GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的配制方法包括：牛精液稀釋液的配制和牛精液冷凍液的配制；

牛精液稀釋液的配制方法包括以下步驟：

用電子天平稱取TCM199?2克、三羥基氨基甲烷40克、檸檬酸20克、丙酮酸鈉0.1克、果糖5克、80萬單位青霉素鈉1克；

將TCM199、三羥甲基氨基甲烷、檸檬酸、丙酮酸鈉、果糖和80萬單位青霉素鈉裝入1000毫升容量瓶中，加入雙蒸水500毫升搖動溶解，待全部固形物溶解后再用雙蒸水定容到1000毫升；

將定容好的牛精液稀釋液進行過濾分裝，分裝玻璃瓶必須事先高壓滅菌，分裝量為100毫升～200毫升；

牛精液冷凍液的配制方法包括以下步驟：

冷凍液分為第一液和第二液，第一液直接稀釋鮮精，第二液用于精液平衡；第一液配制方法：準確抽取牛精液稀釋液25毫升，將其注入100ml燒杯中，再抽取精制卵黃5毫升和甘油0.5毫升，一并加入盛有25ml牛精液稀釋液的燒杯中，用玻璃棒逆時針攪動2分鐘，靜置備用；

第二液配制方法：準確抽取牛精液稀釋液25毫升，將其注入100ml燒杯中，再抽取精制卵黃5毫升和甘油3毫升，一并加入盛有25ml牛精液稀釋液的燒杯中，用玻璃棒逆時針攪動2分鐘，靜置備用。

本發明實施例的另一目的在于提供一種GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的使用方法，該GL和TCM199作為牛精液稀釋液和冷凍液的的使用方法包括以下步驟：

第一步，首先用電子天平稱取TCM199?2克、三羥基氨基甲烷40克、檸檬酸20克、丙酮酸鈉0.1克、果糖5克、80萬單位青霉素鈉1克；將三羥基氨基甲烷、檸檬酸、丙酮酸鈉、果糖和80萬單位青霉素鈉裝入1000毫升容量瓶中，加入雙蒸水500毫升搖動溶解，待全部固形物溶解后再用雙蒸水定容到1000毫升；將定容好的牛精液稀釋液進行過濾分裝，分裝玻璃瓶必須事先高壓滅菌，分裝量為100毫升～200毫升，依使用量和使用頻率確定配制牛精液稀釋液；

第二步，按照冷凍液分為第一液和第二液，第一液直接稀釋鮮精，第二液用于精液平衡；第一液配制方法：牛精液稀釋液25毫升、精制卵黃5毫升、甘油0.5毫升；第二液配制方法：牛精液稀釋液25毫升、精制卵黃5毫升、甘油3毫升。

第三步，采精，采集健康公牛的新鮮精液；

第四步，初次稀釋，將已經預熱到35℃的第一液按照采精量2.5倍稀釋，保溫箱保存或儲運1小時～2小時；

第五步，二次稀釋，將第二液預熱到35℃，加入與初次稀釋時第一液同樣劑量的第二液到等溫的初次稀釋精液中，混勻后立即裝管制成細管精液，細管精液在4℃冷藏箱平衡1.5小時后進行冷凍保存；