[發(fā)明專利]一種鯉鈣蛋白酶抑制蛋白基因克隆及其表達量檢測的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410000114.6
• 申請日: 2014-01-02
• 公開（公告）號: CN103937807A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設計）人: 陳偉興;黃金善;管雪婷;苗曉微
• 申請（專利權）人: 東北農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N15/15
• 分類號: C12N15/15;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種鯉鈣蛋白酶抑制蛋白基因的克隆方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)設計多組引物，分別為：

CAST1-F：5’-TCAACACCTGCATCTTCTGC-3’；

CAST1-R：5’-TTGAGCTGGAGACACAAACG-3’；

CAST2-F：5’-CGGATACAGAAAGGAAGACCTG-3’；

CAST2-R：5’-AGTATGTCCATCGCATCATCTG-3’；

CAST3-F：5’-GAACACAGATGATGCGATGG-3’；

CAST3-R：5’-TGATCTGGTGGAAGGGAGTC-3’；

CAST3R1：5’-GTTTGTCCTGCCTCTAAGTCT-3’；

CAST3R2：5’-TTCAGTCTGCCGTCTCTGGCCCCC-3’；

CAST5R1：5’-GGTTGTGATGATGGTAAAGTGC-3’；

CAST5R2：5’-CCTTATCTTTCAGAGGGTCCGT-3’；

所述CAST1-F、CAST1-R、CAST2-F、CAST2-R、CAST3-F和CAST3-R為克隆CAST基因部分編碼序列用引物，所述CAST3R1、CAST3R2、CAST5R1以及CAST5R2為克隆CAST基因5’、3’UTR用引物；

(2)以目標生物的RNA為模板，在RT-PCR過程中加入步驟(1)設計的引物進行反轉(zhuǎn)錄PCR、電泳，確定CAST基因部分編碼序列、CAST基因5’UTR序列以及CAST基因3’UTR序列，并確定目標生物CAST基因完整序列。

2.一種鯉鈣蛋白酶抑制蛋白基因表達量的檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

根據(jù)權利要求1所確定的CAST基因完整序列，設計引物：

CASTY-F：5’-CATCTGTTTGTCCTGCCTCTAAG-3’；

CASTY-R：5’-GATGAGGAACCTTCTGACAACTG-3’；其中，所述CASTY-F以及CASTY-R為CAST基因表達定量用引物；以目標生物的RNA為模板，在RT-PCR過程中加入引物CASTY-F、引物CASTY-R進行反轉(zhuǎn)錄PCR、電泳，確定目標生物各組織中鯉鈣蛋白酶抑制蛋白基因基因表達情況。