[發明專利]生物樣品中進行生物發光共振能量轉移(BRET)分析的方式和方法

有效

• 申請號: 201380079698.4
• 申請日: 2013-07-18
• 公開（公告）號: CN105555964B
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發明（設計）人: K·P·約翰森;A·思琪納;R·格里斯
• 申請（專利權）人: 洛桑聯邦理工學院
• 主分類號: C12Q1/66
• 分類號: C12Q1/66;G01N33/542
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶啟長;陶家蓉

1.一種包含生物發光共振能量轉移BRET傳感器分子的裝置，所述傳感器分子固定于或吸附于固體載體，所述BRET傳感器分子包括系連至合成的調節分子的蛋白質部分，其中

(i)所述蛋白質部分包含連接至結合蛋白BP的熒光素酶，所述結合蛋白能結合感興趣的分析物；

(ii)所述合成的調節分子包含能分子內結合結合蛋白BP的配體，以及能接受存在合適熒光素酶底物時通過共振能量轉移的來自所述熒光素酶的能量的熒光受體，和

(iii)其中分析物與BP的結合改變BRET傳感器分子的BP和配體的分子內結合的程度，從而導致BRET效率的變化。

2.如權利要求1所述的裝置，其中所述合成的調節分子位置特異地系連至所述蛋白質部分。

3.如權利要求2所述的裝置，其中所述合成的調節分子通過天然或非天然氨基酸或通過蛋白質標記標簽，位置特異地系連至所述蛋白質部分。

4.如權利要求3所述的裝置，其中所述蛋白質標記標簽是自標記蛋白質，且其中所述合成的調節分子通過合適的反應基團進行系連。

5.如權利要求4所述的裝置，其中所述自標記蛋白質是SNAP-標簽、CLIP-標簽或Halo-標簽。

6.如權利要求3所述的裝置，其中所述蛋白質標記標簽是通過酶的作用進行標記的標簽。

7.如權利要求6所述的裝置，所述酶是分選酶、硫辛酸連接酶或磷酸泛酰巰基乙胺轉移酶。

8.如權利要求3所述的裝置，其中所述氨基酸是半胱氨酸或非天然氨基酸，所述氨基酸允許位置特異性化學偶聯反應。

9.如權利要求8所述的裝置，其中位置特異性化學偶聯反應是點擊化學。

10.如前述權利要求中任一項所述的裝置，其中熒光素酶是納米熒光素酶。

11.如權利要求1-9中任一項所述的裝置，其中所述感興趣的分析物是藥物、代謝物、蛋白質、生物標記物或核酸分子。

12.如權利要求11所述的裝置，其中所述BP是二氫葉酸還原酶或其環狀排列的變體。

13.如權利要求11所述的裝置，其中所述BP與作為分子內配體的甲氧芐啶、氨甲蝶呤或其變體組合。

14.如權利要求11所述的裝置，其中所述BP是人碳酸酐酶。

15.如權利要求11所述的裝置，其中所述所述BP是人碳酸酐酶，與作為分子內配體的4-(氨基甲基)苯磺酰胺或其變體組合。

16.如權利要求11所述的裝置，其中所述BP是FK506結合蛋白。

17.如權利要求11所述的裝置，其中所述BP是FK506結合蛋白，與作為分子內配體的三甲氧基苯基脯氨酰胺N-苯甲酰苯胺或其變體組合。

18.如權利要求11所述的裝置，其中所述BP是DIG10.3。

19.如權利要求11所述的裝置，其中所述BP是DIG10.3，與作為分子內配體的孕酮或其變體組合。

20.如權利要求11所述的裝置，其中所述BP是親環蛋白ACypA或其環狀排列的變體。

21.如權利要求11所述的裝置，其中所述BP是親環蛋白A CypA或其環狀排列的變體，與作為分子內配體的5-(對-氨基芐基)-海因酸乙酯、環孢霉素A或其變體組合。